【摘 要】
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海南根瘤菌I66分离自中国海南省的波状叶山蚂蝗的根瘤,是中国特有的根瘤菌资源.用EcoRI酶切I66总DNA,回收2.1-2.5Kb长的DNA片段,并以pUC18为载体构建部分基因文库.在该研究Xb
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海南根瘤菌I66分离自中国海南省的波状叶山蚂蝗的根瘤,是中国特有的根瘤菌资源.用EcoRI酶切I66总DNA,回收2.1-2.5Kb长的DNA片段,并以pUC18为载体构建部分基因文库.在该研究XbaI酶切I66总DNA,回收4.0kb和6.0kb左右长的DNA片段,以pUC18为载体,构建部分基因文库.用042BnodD作探针,将从文库中提取的500个质粒进行Southern点杂交,获得2个阳性克隆,将其所携带的质粒分别命名为pUOD75和pUOD73.酶切pUOD75,回收该质粒上的外源DNA片段,克隆到pBBR1-MCS-5上,并命名此质粒为pBOD75.在豌豆根瘤菌蚕豆生物型DNLPR5045系统中,对含有I66nodD基因DNA片段的pBOD75进行功能检测.利用LPR5045系统检测I66nod基因与其它16种类黄酮化合物的反应,发现其中11种能与之作用而呈现蓝色反应.将nodD基因片段克隆到表达载体pThioHisA、B和C,得到了3个重组1质粒pNODDA、pNODDB和pNODDC.通过阅读框分析得知,pNODDC的nodD基因的阅读框架与pThioHisC上的trxA基因阅读框架吻合.用lPTG诱导的E.coliTop10的全细胞蛋白经SDS-PAGE电泳和Western钱迹检测证明融合基因表达成功,融合蛋白的分子量为48kDa,为TrxA与NodD之和.
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