【摘 要】
：
采用PCR方法从在肠杆菌K-12株中正确扩增出CKS基因,将其克隆于原核表达载体pTrcHisB,构建了通用的CKS融合蛋白表达载体pTrcHisCKS.该载体表达的CKS融合蛋白N端带有6个组氨酸
论文部分内容阅读
采用PCR方法从在肠杆菌K-12株中正确扩增出CKS基因,将其克隆于原核表达载体pTrcHisB,构建了通用的CKS融合蛋白表达载体pTrcHisCKS.该载体表达的CKS融合蛋白N端带有6个组氨酸尾(6His tag),可用亲合层析法一步纯化,且能用人鼻病毒3C蛋白酶酶解除去CKS 融合伴侣.将由PCR扩增的HIV-1 gp120、p55、p66、p24、p17、gp41、HEV-2gp36及gp41与HEV-2的13个氨基酸多肽特异性抗原决定簇融合的嵌合基因,分别克隆至表达载体pTrcHisCKS,而构建成相应的重组表达质粒,在宿主菌中表达的结果表明,重组质粒都能表达出相应的CKS融合蛋白,其中CKS-p24、p17和gp36主要为可溶性蛋白;而全长CKS-gp120、p55、p66则主要为不可溶性蛋白,且有不同程度的裂解;CKS-gp41和CKS-gp41+gp36(13)主要为不可溶 性蛋白.用经Ni-NTA一步法纯化后的表达产物进行免疫学检测,ELISA及Western blot结果 表明所有HIV CKS融合蛋白都有良好的抗原性,HIV-1/2嵌合蛋白能检测到HIV-1相应的单克 隆抗体.人鼻病毒3c蛋白酶酶解CKS-p24后,经再次亲合层析,得到了纯化的非融合性p24蛋白.选取粗纯的CKS-gp120、gp41、p55、p66、p24、p17、及gp36作搞原,以棵变性形式吸 附在醋酸纤维膜上,制成重组免疫印迹试剂膜条,膜条对HIV抗体阳性血清有反应.
其他文献
用光学显微镜技术研究了巴西橡胶树(Hevea brasiliensis Mull.Arg)芽接树接穗和砧木的关系,重点研究了与木质部生长和发育有关的问题.采用树皮嫁接的方法研究了接穗和砧木木
随着电力电子设备的广泛使用,电力系统中的谐波污染问题越来越引起人们的重视和关注。由于传统的无源电力滤波器只能吸收固定频率的谐波,且体积大、容易和系统发生谐振,使得
工作人员选择了观赏价值和经济价值都很高的大花飞燕草,鹤望兰及其它5种观赏花卉进行组织培养.采用大花飞燕草的种子胚和叶片作外植体,试验了各种不同的培养条件和方法,首次
Yb3+掺杂晶体材料是重要的激光材料,在超短脉冲激光、大功率激光等领域有重要应用前景,但长期以来很难通过实验拟合确定Yb3+晶体场参数,尤其是低对称体系,从头计算是解决此问
该文对云南大理、腾冲等地采集的高温温泉水样及火山口土样;从元江、版纳等地采集的高温土样以及从昆明郊区采集的堆肥土样;从新疆等地采集的沙漠土样采用不同的预处理方式,
聚β-羟基丁酸酯〔poly(β-hydroxybutyrate),PHB〕是由生物发酵获得的一处可生 物降解的脂肪族聚酯,它除了具有高聚物的基本性质外,其可生物降解性和生物相容性倍受人们的关
目前我国的空调系统大多数采用节流调节,节能潜力十分巨大.采用变频调速装置改造旧系统中水泵、风机的运行方式,是提高经济效益的重要途径.在今后的空调系统设计中,应大力推
Alzheimer病(AD)是一种进行性的精神衰退的疾病.AD有二个明显的病理特征,即老年斑和神经原纤维的缠结(FNTs),迄今,对NFTs的成因尚未阐明.研究发现,NFTs是由配对的螺旋纤丝(PH
目的:观察由摘除卵巢诱发模仿绝经后骨质疏松模型形成过程中某些骨代谢生化指标的变化趋势.方法:2月龄雌性SD大鼠30只,分为两组:实验组(ovx)切除双侧卵巢,对照组(sham)行假手