【摘 要】
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采用PCR方法从在肠杆菌K-12株中正确扩增出CKS基因,将其克隆于原核表达载体pTrcHisB,构建了通用的CKS融合蛋白表达载体pTrcHisCKS.该载体表达的CKS融合蛋白N端带有6个组氨酸
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采用PCR方法从在肠杆菌K-12株中正确扩增出CKS基因,将其克隆于原核表达载体pTrcHisB,构建了通用的CKS融合蛋白表达载体pTrcHisCKS.该载体表达的CKS融合蛋白N端带有6个组氨酸尾(6His tag),可用亲合层析法一步纯化,且能用人鼻病毒3C蛋白酶酶解除去CKS 融合伴侣.将由PCR扩增的HIV-1 gp120、p55、p66、p24、p17、gp41、HEV-2gp36及gp41与HEV-2的13个氨基酸多肽特异性抗原决定簇融合的嵌合基因,分别克隆至表达载体pTrcHisCKS,而构建成相应的重组表达质粒,在宿主菌中表达的结果表明,重组质粒都能表达出相应的CKS融合蛋白,其中CKS-p24、p17和gp36主要为可溶性蛋白;而全长CKS-gp120、p55、p66则主要为不可溶性蛋白,且有不同程度的裂解;CKS-gp41和CKS-gp41+gp36(13)主要为不可溶 性蛋白.用经Ni-NTA一步法纯化后的表达产物进行免疫学检测,ELISA及Western blot结果 表明所有HIV CKS融合蛋白都有良好的抗原性,HIV-1/2嵌合蛋白能检测到HIV-1相应的单克 隆抗体.人鼻病毒3c蛋白酶酶解CKS-p24后,经再次亲合层析,得到了纯化的非融合性p24蛋白.选取粗纯的CKS-gp120、gp41、p55、p66、p24、p17、及gp36作搞原,以棵变性形式吸 附在醋酸纤维膜上,制成重组免疫印迹试剂膜条,膜条对HIV抗体阳性血清有反应.
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