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LAMP（环介导等温扩增）技术作为一种新型分子生物学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低廉等优点，非常适合基层实验室进行目标微生物的快速诊断。本研究建立了鸭病毒性肠炎（鸭瘟）病毒(DEV)、番鸭细小病毒(MDPV)、禽传染性喉气管炎病毒(ILTV)的LAMP检测技术，以及H5亚型水禽流感病毒(H5AIV)的RT-LAMP检测技术，并应用于临床疑似样品的检测。
1、建立了鸭病毒性肠炎（鸭瘟）病毒(DEV)的LAMP检测方法。根据Genbank中注册的DEV全基因组序列，设计一组对应DEV UL6基因序列6个区域的4条特异性引物（外引物F3与B3，内引物FIP与BIP）进行核酸扩增，建立了DEV LAMP方法，并优化了LAMP方法的反应条件。该等温扩增反应条件为62℃孵育50min，80℃孵育2min终止反应。反应结果可用肉眼直接观察：在阳性扩增产物中有沉淀（焦磷酸镁）产生；加入核酸染色剂SYBR Green I，阳性管呈绿色，阴性管依旧保持染色剂原色橙黄色。反应产物用特异性内切酶EcoR I进行酶切鉴定，可以切出与预期大小相符的目的条带。DEV LAMP检测方法高度特异，与已建立的常规PCR技术进行相比，其灵敏性比PCR检测法高100倍，而临床样品检测结果与PCR方法完全一致。
2、建立了番鸭细小病毒(MDPV)的LAMP方法。本实验设计对应MDPV的VP3基因序列的引物组进行核酸扩增，建立LAMP反应体系，等温扩增反应条件为63℃孵育50min。反应结果用特异性内切酶EcoRI进行酶切鉴定。比较试验证明，LAMP技术与对照病原没有交叉反应，并能特异地区分MDPV与GPV。检测21份临床样品，LAMP法阳性检测率为42.9％，PCR法为33.3％。比较实验显示肉眼可视观察法与电泳法的灵敏性略低，具有与常规PCR结果电泳分析法相匹敌的灵敏性。
3、建立了禽传染性喉气管炎病毒(ILTV)的LAMP方法。选取TK基因保守区序列设计引物建立LAMP反应体系用于ILTV检测，添加环引物优化反应条件为63℃孵育30min。反应特异性已用特异性内切酶EcoR I进行鉴定。用已建立的LAMP技术检测临床样品，以病毒分离鉴定方法作为参照，LAMP技术比常规PCR方法有更高的阳性检测率，检测率达到100％。
4、建立了H5亚型水禽流感病毒(H5 AIV)的RT-LAMP方法。根据H5亚型禽 流感病毒HA基因保守区序列，设计4条特异性引物用于核酸扩增，优化RT-LAMP反应体系，反应条件为42℃反转录10min后，64℃等温扩增反应60min。反应特异性用内切酶EcoR I与Kpn I进行扩增产物的双酶切鉴定，与已建立的常规PCR技术进行相比，其灵敏性比PCR检测法高10倍。用建立的RT-LAMP技术检测临床样品，检测结果与RT-PCR方法符合率均达到100％。
本研究建立的4种禽病病原LAMP检测方法可在恒温水浴锅中完成整个反应过程，具有快速、简单、灵敏、高特异性等优点，适合于检验检疫部门、基层兽医防疫监督所和基层实验室使用。