蝎在漫长的进化过程中为生存或防卫的需要在其体内产生了一系列毒素蛋白，这些活性多肽可选择性地特异结合并调控可兴奋细胞膜上的离子通道。其中，蝎昆虫神经毒素能够专一作用于昆虫而对哺乳动物无害或毒性很小，因此可利用此类毒素开发新型生物杀虫剂和开展抗虫害转基因植物的研究。ANEPⅢ(Anti-neuroexcitation peptideⅢ)就是其中一种。　　为构建重组表达载体pPIC9K-ANEPⅢ，根据ANEPⅢ的cDNA序列设计引物，其中上游引物带EcoRⅠ酶切位点，下游引物带NotⅠ酶切位点。以质粒pNJUTRXA-ANEPⅢT为模板，进行PCR扩增反应。将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒酶切产物进行连接并导入大肠杆菌JM109，用PCR法筛选阳性克隆并用双酶切鉴定重组质粒pPIC9K-ANEPⅢ。构建的重组质粒pPIC9K-ANEPⅢ最后经测序分析后，通过电转化的方法将pPIC9K-ANEPⅢ转入毕赤酵母宿主菌GS115中，通过MD平板、MM平板、含G418的YPD平板和酵母基因组PCR等步骤逐步筛选转化子，最终选择得到一株耐受2.0 mg·ml-1G418表型为His+Mut+的菌株用以后面表达实验。经0.5％的甲醇诱导，取不同诱导时间的表达上清液进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析，确认7800 Da左右的毒性目的蛋白已经获得分泌表达，初步检测得知在诱导72h时表达量最高。同时将质粒pNJUTRXA-ANEPⅢ转化大肠杆菌BL21，通过IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导目标蛋白ANEPⅢ，并用Tricine-SDS-PAGE电泳进行定性分析，检测得到8000 Da左右的目的蛋白。　　对ANEPⅢ基因的原核与真核表达产物进行提取、初步纯化后进行杀虫试验。结果表明，原核表达产物没有显示出生物活性，而真核表达产物具有较好的生物学活性。浓度为1 mg·ml-1的真核表达产物，喂食舞毒蛾2龄幼虫5天后，校正死亡率达到38％，幼虫食叶量下降50％。黄粉虫的生物测定实验结果表明:喂食1 mg·ml-1的真核表达产物5天后，黄粉虫幼虫的校正死亡率为20％。