第一部分 胃癌启动阶段及演进阶段大鼠的基因表达谱的 研究目的 研究正常大鼠与癌变启动阶段及演进阶段基因表达谱，大规模、高通量分析癌变启动阶段及肿瘤演进阶段时基因表达水平的变化。方法（1）实验大鼠分为正常对照组，癌变的启动模型组，癌变的演进阶段模型组，（2）从胃中抽提mRNA，经反复转录分别用Cy5、Cy3荧光标记，获得三组动物来源的cDNA探针；（3）cDNA探针与Biodoor基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果（1）在胃癌启动阶段有33/2000的基因表达下调；7/2000的基因表达功能上调（2）在胃癌变的演进阶段26/2000的基因表达功能下调；56/2000的基因表达功能上调；（3）所得到的差异表达基因经过生物信息学分析发现在胃癌的启动及演进阶段有多种类型的基因参与，如信号转导基因；细胞周期调控基因；与DNA复制、修复有关酶基因及与癌基因同源的基因。结论 胃癌启动阶段及演进阶段基因表达谱分析发现，癌变是多基因参与表达的结果。 第二部分 原花青素癌化学预防作用机理的实验研究1.葡萄籽原花青素的抗氧化作用 以大鼠多形核白细胞（PMNs）为材料，利用酚红氧化原理比色测定了葡萄籽原花青素对巴豆油刺 原花青素对癌化学预防机理的研究 激 PMNS释放过氧化氢（H从）的影响。研究表明：葡萄籽原花青素 能显著性抑制巴豆油刺激PMNS释放比山；葡萄籽原花青素的血清药 理学方法研究，同样观察到葡萄籽原花青素具有抑制 比八释放的作 用，该作用在给药后lh左右最强，且具有一定的时效关系和量效关 系；对巴豆油诱发的小鼠肝线粒体脂质过氧化，葡萄籽原花青素具 有显著性抑制作用，能显著性提高肝线粒体SOD活力，减少MDA生 成。整体实验进一步表明，葡萄籽原花青素能显著性抑制促癌物巴 豆油所致的小鼠耳廓肿胀。 2、葡萄籽原花青素抗致癌剂对DNA的加成作用’H1dR掺H 细胞mA中进行标i乙测定上清液中的放射强度来判断加A损伤及葡萄 籽原花青素对细胞的保护反应．结果不同剂量的 MNNG可以使 L；；J胞 DNA的损伤加重，给予葡萄籽原花青素后可以使损伤减轻。 葡萄籽原花青素（procyanidins，简称盯）是由不同数量的儿茶素或 表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体。可以和亚硝酸胺类发生化 学反应，阻断MNNG的致癌作用，洲NG在体内可以使机体产生自由基， 而原花青素分子中的黄烷－3，4－二醇是具有捕获过氧离子和OH的基本 结构，因而原花青素可以对抗MNNG对mA的损伤反应，且有一定的量 效关系。 3、葡萄籽原花青素对细胞信号传导通路的影响对大鼠脑蛋 白激酶C（比C）进行了提取及纯化，采用【Y－’刊灯P掺入法对队C 活性进行了研究。葡萄籽原花青素对二乙酞甘油（Diolein）活化的 PKC活性有显著性抑制作用；对十四烷酞佛波酯（TPA）d化的PKC 活性在一定浓度范围内显示出较强的抑制作用；对不依赖Ca’＼磷脂 酞丝氨酸、Diolein的硫酸鱼精蛋白底物，初步研究未观察到葡萄籽 16 南京中医药大学博士研究论文 原花青素对PKC磷酸化鱼精蛋白过程的抑命1作用，表明葡萄籽原花 青素对队C的抑制作用可能不是通过改变酶的活性中。。，而可能是 通过对信号传递过程的中间代谢产物的影响而抑制了PKC的活性。 以“C标记的卜乌氨酸为底物，对巴豆油活化的小鼠表皮细胞鸟氨酸 脱慰酶（ODC）活性增高葡萄籽原花青素有显著性抑制作用。 4、葡萄籽原花青素对拓扑异构酶的作用 ＊叩n是真核细 胞中生存所必不可少的核酶。它的作用涉及到核酶代谢的许多方面包括 DNA复制、mRM的加工、染色体的分离浓缩、核基质的组织等等。有趣 的是许多抗癌药物正是通过干扰DNA的复制、重组抛因的表达而发挥 抗肿瘤作用的，而5！起DM单链断裂、双链断裂的DNA嵌入剂、非嵌A 剂都是DNA拓扑异构酶的抑制剂，进而不少学者提出，ONA拓扑异构酶 是治疗肿瘤的一个重要靶点。但葡萄籽原花青素体外浓度达 5 ogh时， 未见对拓扑异构酶11活性产生抑制作用。 5、葡萄籽原花青素对肿瘤细胞株增殖的抑制作用 用 MTT法