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目的:研究辣椒素(CAP)不同剂量、不同时期对大鼠胃动力的影响及机制。方法:(1)分组:实验分为实验组与对照组D组,其中实验组根据CAP不同剂量0.1mg/kg/d、1mg/kg/d、5mg/kg/d分为A组、B组、C组。(2)分期:实验分4期完成,分期方法:Ⅰ期为3天,Ⅱ期为1周,Ⅲ期为2周,IV期为4周。故每组按照分期方法又分4个小组,例如:A组又分为A1、A2、A3、A4分别对应4期,每组每期大鼠10只,共160只。(3)CAP溶液的配制:各称取1mg、10mg、50mg CAP,将称重后CAP分别充分溶解于10%吐温20ml+10%酒精1ml+0.9%HCL79ml的CAP溶剂中,获得浓度为0.01mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml CAP溶液。(4)CAP给药方法:A组:给予大鼠0.01mg/ml CAP溶液,剂量0.1mg/kg/d,每天灌胃1次。完成后给予普通饲料,自由进食进水;B组:给予大鼠0.1mg/ml CAP溶液,剂量1mg/kg/d,每天灌胃1次。完成后给予普通饲料,自由进食进水;C组:给予大鼠0.5mg/ml CAP溶液,剂量5mg/kg/d,每天灌胃1次。完成后给予普通饲料,自由进食进水;D组:CAP溶剂2.5ml灌胃,每天1次,完成后给予普通饲料,自由进食进水。(5)检测指标:(1)一般情况:实验过程中观察大鼠的精神状态、食欲、大小便等一般情况。(2)采用核素显像法检测胃排空,记录所有大鼠胃半排空时间(T50%),测定第65min胃排空率(GE65%)。(3)大鼠胃粘膜屏障的检测:3%戊巴比妥钠处死大鼠,将胃完整取出,沿胃大弯剪开,生理盐水冲洗干净,肉眼观察粘膜情况,采用Guth标准改良评分标准评定胃粘膜损伤情况;取胃体组织1块,行HE染色病理组织学检查,采用Masuda标准评定胃黏膜病理损伤情况。(4)免疫组化检测胃黏膜TRPV1、CGRP、SP的表达,并用彩色病理图像分析软件分析指标的阳性指数。结果:1.大鼠一般情况:所有实验大鼠精神状态良好,行动灵活,食欲佳,皮毛光滑,大小便正常,无死亡。2.大鼠胃半排空时间(T50%)(min):A1、A2、A3、A4组T50%(min)分别是:32.36±5.86(min)、35.18±6.73(min)、36.91±4.77(min)、29.32±3.26(min);B1、B2、B3、B4组T50%(min)分别是:42.06±4.99(min)、44.93±7.88(min)、34.05±5.29(min)、23.87±3.59(min);C1、C2、C3、C4组T50%(min)分别是:45.65±6.73(min)、41.35±5.92(min)、29.56±5.58(min)、25.79±4.52(min);D1、D2、D3、D4组T50%(min)分别是:23.15±4.52(min)、26.17±4.33(min)、26.89±6.93(min)、22.56±4.98(min)。(1)CAP干预与对照组T50%比较:A组与D组比较:A1、A2、A3、A4组T50%较D1、D2、D3、D4组显著延长(P<0.05);B组与D组比较:B1、B2、B3组T50%较D1、D2、D3组显著延长(P<0.05);C组与D组比较:C1、C2组T50%较D1、D2组显著延长(P<0.05)。(2)不同剂量CAP干预T50%(min)比较:A组与B组:A1、A2组T50%较B1、B2组显著缩短(P<0.05),A4组T50%较B4组延长(P<0.05);A组与C组:A1、A2组T50%较C1、C2组显著缩短(P<0.05),A3组T50%较C3组显著延长(P<0.05);B组与C组各期比较无统计学意义。(3)不同时期CAP干预T50%(min)比较:其中A4组T50%较A2、A3组显著缩短(P<0.05);B1组T50%较B3、B4组时间延长(P<0.05),B2组T50%较B3、B4组时间显著延长(P<0.05),B3组T50%较B4组显著延长(P<0.05);C1组T50%较C3、C4组显著延长(P<0.05),C2组T50%较C3、C4组显著延长(P<0.05);D组各期两两比较均无统计学意义。3.大鼠第65min胃排空率(GE65min%):A1、A2、A3、A4组GE65min%分别是:59.36±8.86、61.18±6.73、62.01±5.77、63.32±7.26;B1、B2、B3、B4组GE65min%分别是:58.31±13.78、61.10±7.88、61.93±6.29、68.74±13.59;C1、C2、C3、C4组GE65min%分别是:60.39±10.74、62.44±7.56、65.17±12.44、70.53±7.56;D1、D2、D3、D4组T50%(min)分别是:76.17±13.56、74.93±10.78、71.35±14.30、73.82±11.46。CAP干预与对照组GE65min%比较:A组与D组:其中A1组<D1组(F=2.342,P=0.004)、A2组<D2组(F=2.566,P=0.003)、A3组<D3组(F=4.544,P=0.043)、A4组<D4组(F=2.492,P=0.025);B组与D组:B1组<D1组(F=0.968,P=0.009)、B2组<D2组(F=1.871,P=0.004)、B3组<D3组(F=3.824,P=0.045);C组与D组GE65min%比较:C1组<D1组(F=1.594,P=0.010)、C2组<D2组(F=2.033,P=0.008)。C3、C4组与D3、D4组相比均无统计学意义。4.大鼠胃黏膜组织TRPV1光密度(PI)值:A1、A2、A3、A4组TRPV1 PI值分别是:1.83±0.22、1.89±0.18、1.87±0.14、1.93±0.14;B1、B2、B3、B4组TRPV1 PI值分别是:1.82±0.20、1.90±0.24、1.94±0.27、1.87±0.20;C1、C2、C3、C4组TRPV1 PI值分别是:1.89±0.26、1.95±0.29、1.93±0.22、1.85±0.25;D1、D2、D3、D4组TRPV1 PI值分别是:1.57±0.17、1.64±0.15、1.65±0.21、1.59±0.16。(1)CAP干预与对照组TRPV1 PI值比较:A组与D组:A1组>D1组(F=0.597,P=0.008)、A2组>D2组(F=0.465,P=0.037)、A3组>D3组(F=2.250,P=0.013)A4组>D4组(F=1.316,P<0.05);B组与D组:B1组>D1组(F=0.723,P=0.007)、B2组>D2组(F=0.391,P=0.009)、B3组>D3组(F=0.065,P=0.015、B4组>D4组(F=0.391,P=0.009);C组与D组:C1组>D1组(F=0.428,P=0.04)、C2组>D2组(F=0.268,P=0.008)、C3组>D3组(F=0.911,P=0.009)、C4组>D4组(F=0.64,P<0.05)。(2)不同剂量CAP干预TRPV1 PI值比较:A组与C组、A组与B组、B组与C组相比无统计学意义。(3)不同时期CAP干预TRPV1PI值比较:A、B、C、D组各期组内胃黏膜组织TRPV1光密度(PI)两两比较均无统计学意义。5.大鼠胃黏膜组织CGRP光密度(PI)值:A1、A2、A3、A4组CGRP PI值分别是:3.93±0.42、3.61±0.48、3.29±0.34、3.31±0.46;B1、B2、B3、B4组CGRP PI值分别是:4.72±0.50、4.68±0.52、3.63±0.57、3.10.±0.39;C1、C2、C3、C4组CGRP PI值分别是:4.89±0.56、4.95±0.48、3.18±0.52、2.95±0.45;D1、D2、D3、D4组CGRP PI值分别是:2.57±0.47、2.64±0.55、2.75±0.61、2.69±0.56。(1)CAP干预与对照组CGRP PI值比较:A组与D组:A1组>D1组(F=1.252,P<0.05)、A2组>D2组(F=2.095,P<0.05)、A3组>D3组(F=3.325,P=0.027)、A4组>D4组(F=1.482,P=0.014);B组与D组:B1组>D1组(F=0.884,P<0.05)、B2组>D2组(F=1.119,P<0.05)、B3组>D3组(F=1.183,P=0.004)。B4组与D4组相比均无统计学意义;C组与D组:C1组>D1组(F=0.704,P<0.001)、C2组>D2组(F=1.313,P<0.05)。C3组、C4组与D3、D4组相比均无统计学意义。(2)不同剂量CAP干预CGRP PI值比较:A组与B组:A1、A2组大鼠胃黏膜CGRP表达比B1、B2组大鼠表达显著减少(P<0.05);A组与C组:A1、A2组大鼠胃黏膜CGRP表达比C1、C2组表达显著减少(P<0.05),C4组大鼠胃黏膜CGRP表达下降明显,且明显小于A4组有统计学意义;B组与C组:B1、B2、B4组大鼠胃黏膜CGRP表达与C1、C2、C4组相比无差异(P>0.05),C3<B3组(P<0.05)。(3)不同时期CAP干预CGRP PI值比较:A组各期:A1>A3(P<0.05),A2>A4(P<0.05),A1>A4(P<0.05);B组各期:B2>B3(P<0.05),B1>B3(P<0.05),B2>B4(P<0.05),B1>B4(P<0.05),B3>B4(P<0.05);C组各期:C2>C3(P<0.05),C1>C3(P<0.05)C2>C4(P<0.05),C1>C4(P<0.05);D组各期大鼠胃黏膜CGRP光密度(PI)值比较无明显变化。6.大鼠胃黏膜SP光密度(PI)值:A1、A2、A3、A4组PI值分别是:1.28±0.18、1.27±0.14、1.27±0.11、1.30±0.17;B1、B2、B3、B4组PI值分别是:1.30±0.10、1.24±0.12、1.26±0.11、1.29±0.09;C1、C2、C3、C4组PI值分别是:1.29±0.22、1.25±0.14、1.28±0.13、1.30±0.19;D1、D2、D3、D4组PI值分别是:1.27±0.17、1.23±0.11、1.26±0.15、1.29±0.12。(1)CAP干预与对照组SP PI值比较:A、B、C组大鼠胃黏膜SP表达与D组相应各期相比均无统计学意义。(2)不同剂量CAP干预SP PI值比较:A组与B组、A组与C组、B组与C组大鼠胃黏膜SP表达相比较,相应各期大鼠胃黏膜SP表达均无明显差异,无统计学意义。(5)不同时期CAP干预SP PI值比较:A、B、C、D组大鼠胃黏膜SP表达组内比较均无统计学意义。7.胃粘膜损伤指数:肉眼观察所有实验组及对照组大鼠胃粘膜光滑,未见明显出血、糜烂灶。根据Guth改良评分,均为0分。胃粘膜损伤病理评分:HE染色光学显微镜下观察:所有标本黏膜层结构完整,深层腺体排列整齐,未见炎性细胞浸润,组织结果完整。实验组与对照组大鼠胃黏膜Masude评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.CAP抑制胃动力:正常大鼠给予0.1mg/kg、1mg/kg、5mg/kg剂量CAP溶液灌胃3天-4周均有抑制胃排空作用,且剂量越大抑制作用越强,随着时间推移,大鼠对CAP的耐受性增强,CAP抑制胃排空效应逐渐减弱。2.CAP可上调大鼠胃黏膜TRPV1的表达,但不同剂量、不同时间CAP干预对大鼠胃黏膜TRPV1的表达无明显差异。3.CAP可促进CGRP的释放,CAP剂量越大,CGRP释放越多。4.CAP对大鼠胃黏膜SP的释放无影响。5.0.1mg/kg、1mg/kg、5mg/kg CAP溶液灌胃对大鼠黏膜屏障无明显影响。