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背景：原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,且死亡率高,如今已经成为严重威胁人类健康和生命的疾病,其危险性不容小视。人体中的蛋白质中有一多半发生了糖基化修饰。糖基化对于蛋白质的结构、稳定和定位起着重要的作用,并且参与细胞粘着、细胞凋亡、受体激活、信号转导、胞吞作用等重要的生物过程。经过研究发现,蛋白质糖基化的异常变化与癌症或其它疾病之间有密切的关系,一些糖蛋白已经可以作为原发性肝癌的潜在标志物。凝集素可以特异性识别糖蛋白上的糖链,并与其进行可逆性的非共价结合,可用于从血清样品中分离富集目的糖蛋白,从而减少在鉴定分析时高丰度非糖蛋白的影响。方法：本实验先将橙黄网胞盘菌凝集素(AAL)、麦胚凝集素(WGA)和伴刀豆凝集素(Con A)固定在环氧化磁性微粒上,制备出AAL-磁性微粒复合物、WGA-磁性微粒复合物和ConA-磁性微粒复合物,然后分别利用它们从45份混合健康志愿者血清和45份混合肝癌患者血清中分离纯化糖蛋白,再通过LC-MS/MS对提取的糖蛋白进行鉴定分析。结果：(1)从健康志愿者血清中鉴定出32种AAL结合糖蛋白,有23种在Uniprot数据库注释为糖蛋白；有9种经过NetNGlyc软件预测出N-糖基化位点,其中有2种在本实验中确认为AAL结合糖蛋白。从肝癌患者血清中鉴定出35种AAL结合糖蛋白,有24种已经在Uniprot数据库中注释为糖蛋白；有11种经过NetNGlyc软件预测出N-糖基化位点,其中有1种在本实验中确认为AAL结合糖蛋白。有15种AAL结合糖蛋白共存于肝癌患者血清和健康志愿者血清中,通过emPAI分析发现,分别有7种上调表达和1种下调表达的AAL结合糖蛋白。有20种AAL结合糖蛋白只在肝癌患者血清中鉴定出来,其中有3种高表达糖蛋白。(2)从健康志愿者血清中鉴定出81种WGA结合糖蛋白,有62种在Uniprot数据库注释为糖蛋白；有19种经过NetNGlyc软件预测出N-糖基化位点,其中有4种在本实验中确认为WGA结合糖蛋白。从肝癌患者血清中鉴定出78种WGA结合糖蛋白,有58种已经在Uniprot数据库中注释为糖蛋白；有20种经过NetNGlyc软件预测出N-糖基化位点,其中有3种在本实验中确认为WGA结合糖蛋白。有53种WGA结合糖蛋白共存于肝癌患者血清和健康志愿者血清中,通过emPAI分析发现,分别有4种上调表达和8种下调表达的WGA结合糖蛋白。有25种WGA结合糖蛋白只在肝癌患者血清中鉴定出来,其中有1种高表达糖蛋白。(3)从健康志愿者血清中鉴定出32种Con A结合糖蛋白,有26种在Uniprot数据库注释为糖蛋白；有6种经过NetNGlyc软件预测出N-糖基化位点。从肝癌患者血清中鉴定出28种Con A结合糖蛋白,有22种已经在Uniprot数据库中注释为糖蛋白；有6种经过NetNGlyc软件预测出N-糖基化位点,其中有1种在本实验中确认为Con A结合糖蛋白。有25种Con A结合糖蛋白共存于肝癌患者血清和健康志愿者血清中,通过emPAI分析发现,分别有1种上调表达和4种下调表达的Con A结合糖蛋白。有3种Con A结合糖蛋白只在肝癌患者血清中鉴定出来,均为高表达糖蛋白。(4)在健康志愿者和肝癌患者的血清中,有24种糖蛋白单独被AAL提取出来,有76种糖蛋白单独被WGA提取出来,有14种糖蛋白单独被ConA提取出来。在这三种凝集素各自提取的糖蛋白中,只能被AAL和WGA提取的相同糖蛋白有11种,只能被WGA和Con A提取的相同糖蛋白有4种,只能被AAL和Con A提取的相同糖蛋白有2种,可以被三种凝集素共同提取的糖蛋白有14种。结论：AAL-磁性微粒复合物、WGA-磁性微粒复合物和Con A-磁性微粒复合物可以从血清样品中分离纯化特异的糖蛋白。发现18种糖蛋白可以作为潜在的肝癌标志物,经搜索文献发现其中已经有3种糖蛋白可作为检测肝癌的标志物。