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研究背景炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一种病因未明的,多因素诱导的,可能由免疫介导的慢性非特异性肠道炎症,主要临床类型包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn disease,CD)。肠纤维化是 IBD的一种主要并发症,肠道慢性反复的炎症损伤导致慢性炎性细胞大量浸润,成纤维细胞聚集和细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)沉积,并最终导致机体炎症损伤部位过度愈合形成纤维化,导致肠道狭窄甚至梗阻。近年来发现,五羟色胺(5-HT)是一种促进组织纤维化的细胞因子,参与肝纤维化、间质性肺病等多种纤维化疾病的发病过程。5-HT受体(5-HTR)分七个亚型,种类繁多,其中5-HTR2A和5-HTR2B型受体,广泛表达于成纤维细胞、星状细胞和巨噬细胞等间质细胞,与组织纤维化关系最为密切。尽管多项研究证实了 5-HT/5-HTR2B通路在组织纤维化中的作用,但是5-HTR2B受体在肠纤维化中的作用尚不明确。目的1.通过受试者的结肠活检标本探究UC患者与健康对照者5-HTR2B受体表达水平的差异的以及5-HTR2B受体与肠纤维化的关系;2.通过结肠纤维化的小鼠模型探究应用5-HTR2B受体拮抗剂RS-127445干预对小鼠结肠纤维化的作用;3.通过成纤维细胞和巨噬细胞探究5-HTR2B受体作用的机制。方法1.临床标本纳入UC患者和健康对照者,获取受试者血清样本和结肠粘膜活检标本。通过ELISA测定受试者血清和粘膜5-HT水平,通过免疫组化和qPCR评估受试者结肠5-HTR2B表达水平,通过纤维化染色Masson染色和qPCR评估受试者结肠纤维化程度,综合分析5-HTR2B水平与纤维化的联系。2.动物实验通过慢性葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)建立小鼠结肠纤维化的模型,应用5-HTR2B受体拮抗剂RS-127445对造模小鼠进行干预,造模结束后取小鼠结肠样本。应用纤维化染色Masson染色和天狼星红染色以分析RS-127445干预对小鼠结肠纤维化程度的影响,qPCR分析纤维化相关基因的表达水平,ELISA测定小鼠结肠I型胶原蛋白水平变化。3.细胞实验应用CCK-8增殖实验和细胞划痕实验研究5-HT和RS-127445对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3细胞系)增殖和迁移的影响。通过免疫荧光染色研究人肠道成纤维细胞(HIF细胞)5-HTR2B的表达情况,通过qPCR研究5-HT和RS-127445对HIF细胞系活化相关基因的影响。通过qPCR研究5-HT和RS-127445对人单核巨噬细胞(THP-1细胞系)TGF-β1基因表达的影响。结果1.临床标本UC患者结肠粘膜5-HT水平高于健康对照者,5-HTR2B受体表达高于健康对照者,UC患者纤维化程度高于健康对照者,纤维化相关基因α-SMA、Colla2和Col3a1表达水平高于健康对照者,且与5-HTR2B基因表达水平呈正相关。2.动物实验5-HTR2B受体拮抗剂RS-127445干预降低造模小鼠结肠纤维化程度,降低造模小鼠纤维化相关基因α-SMA、Collal和TGF-β1的表达水平,降低造模小鼠结肠I型胶原蛋白水平。3.细胞实验RS-127445抑制NIH/3T3细胞系的增殖和迁移。人肠道成纤维细胞表达5-HTR2B受体,应用拮抗剂RS-127445可以下调细胞活化相关基因α-SMA、Colla1和Col3a1的表达水平。人巨噬细胞也表达5-HTR2B受体,应用RS-127445可以下调TGF-β1的表达水平。结论1.UC患者结肠粘膜5-HTR2B表达高于健康对照者,且与结肠纤维化具有相关性;2.应用5-HTR2B受体拮抗剂RS-127445干预可以降低造模小鼠结肠纤维化程度及纤维化基因的表达;3.5-HTR2B受体拮抗剂RS-127445抑制成纤维细胞的增殖、迁移和活化,抑制巨噬细胞TGF-β1的表达。