拟南芥AtGLR3.3在谷胱甘肽诱导下参与植物先天免疫反应的分子机理研究

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谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸(Glu),半胱氨酸(Cys),甘氨酸(Gly)组成的三肽,是植物和动物细胞中主要的内源性抗氧化物。同时在动物中枢神经系统中,GSH也是一种神经递质。它通过与膜上的离子型谷氨酸受体(iGLRs)结合来介导各神经元之间的交流。但是,在植物细胞中,关于GSH作为信号分子引起的信号通路知之甚少。本研究发现,当外源GSH处理野生型拟南芥(Col-0)叶片时,胞内Ca2+浓度会瞬时升高。同样处理突变体atglr3.3则无Ca+信号升高现象。Col-0叶片在GSH处理前加入谷氨酸受体拮抗剂,胞内Ca2+浓度瞬时升高幅度会降低。因此GSH诱导拟南芥叶片细胞质内Ca2+瞬时升高依赖于AtGLR3.3。通过谷胱甘肽缺失型突变体(pad2),atglr3.3和Col-0植株对细菌Pst DC3000的敏感性实验,我们发现,相对于Col-0,突变体pad2,atglr3.3更易感病。然后我们对标志性防御基因的表达量进行了定量分析。结果表明当病原菌侵染植株时,防御基因在Col-0叶片中的表达量显著升高,而在突变体atglr3.3中则无明显变化。因此,病原菌侵染拟南芥介导防御基因表达依赖于AtGLR3.3。以上实验表明细胞外GSH诱导的防御反应依赖于AtGLR3.3。目前已经证实AtGLR3.3的配体有谷胱甘肽(GSH),氧化型谷胱甘肽(GSSG),丙氨酸(Ala),天冬酰胺(Asn),半胱氨酸(Cys),谷氨酸(Glu),甘氨酸(Gly),丝氨酸(Ser),我们用这八种化学药品处理突变体atglr3.3叶片,均无胞内Ca2+浓度瞬时升高现象,表明AtGLR3.3的配体依赖于AtGLR3.3诱导拟南芥叶片细胞质内Ca2+瞬时升高。但是只有GSH,Cys可以诱导野生型拟南芥发生先天免疫反应。细胞外GSH和Glu同时处理Col-0和突变体atglr3.3后,GSH依赖于AtGLR3.3表达的基因中有19个是防御型基因。而Glu依赖于AtGLR3.3所介导的防御型基因表达变化的只有4个基因。本研究表明,外源GSH介导的信号通路依赖于AtGLR3.3,尽管这些信号通路所引起的现象可能不会有因果联系。
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