帕金森病(Parkinsons Disease,PD)就是上述神经系统退行性病变中的一种.该病多发于老年人,主要临床表现有静止性震颤、肌肉强直、运动障碍以及精神忧郁;主要病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元进行性变性,导致前脑纹状体多巴胺含量大幅度降低<[6]>.由于GDNF对多巴胺能神经元具有特异性营养作用,故从其发现开始,一直作为研究治疗PD的主要对象.到目前为止,利用GDNF基因或蛋白对大鼠和猴帕金森病模型进行治疗研究已经取得了较大进展,即发现大量实验证明,GDNF能保护和恢复6-OHDA或MPTP损伤下的多巴胺能神经元功能,能缓解PD动物模型行动迟缓、四肢僵硬、震颤及体态不稳等方面的症状、能使多巴胺能神经元中所含的酪氨酸羟化酶免疫活性升高,使多巴胺含量增加、多巴胺代谢加强,并能增大多巴胺能神经元的胞体,等等<[7-9]>.然而,应用GDNF蛋白在治疗人类PD的临床试验上却未获成功,大剂量给予GDNF并未使PD病人症状有所改善<[10]>.因此,对GDNF在脑中的作用机制还需要进行深入的研究.该研究内容包括:(1)制作大鼠帕金森病(PD)模型,即通过向单侧纹状体系统注射6-羟多巴(6-OHDA),使黑质多巴胺能神经元受到不同程度损毁;(2)构建带有GFRα-1特异性基因片段的质粒,即从SD大鼠中脑提取总RNA,以RT-PCR方法得到570bp的特异条带,将之克隆到pGEM-T easy载体上,测序证实与Genebank中登录的大鼠GFRα-1序列一致,NCBI BLAST分析上发现该片段与大鼠其他已知基因有同源性;(3)制备大鼠GFRα-1的cRNA探针,将带有GFRα-1基因片段的质粒经酶切制备成模板,用Roche公司的试剂盒通过体外转录方法合成地高辛标记探针;(4)通过原位杂交和RT-PCR方法检测PD大鼠模型脑内GFRα-1 mRNA的变化;(5)用免疫组化和Western杂交方法检测PD大鼠模型脑内GFRα-1蛋白表达变化.