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目的:通过高糖高脂(HGHL)诱导损伤H9C2心肌细胞建立体外糖尿病心肌损伤细胞模型,采用中药葛根的有效成分葛根素(puerarin,Pue)进行干预,观察葛根素干预前后自噬相关蛋白的表达情况,旨在探讨葛根素对高糖高脂诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法:高糖高脂处理H9C2建立心肌细胞损伤模型,HE染色、CCK-8法确定高糖高脂、葛根素的最佳干预时间和浓度。随机分为正常组、模型组、氯喹组、雷帕霉素组和葛根素组。其中,HGHL的造模浓度为HG 33 mmol/L、HL 500μmol/L,氯喹组、雷帕霉素组、葛根素组的干预浓度分别为25μmol/L、0.5μmol/L、1 mmol/L,正常组加入等体积DMEM培养基。处理36h后,分别通过Western blot法检测细胞中LC3-II、p62、Beclin-1及Cleaved Caspase-3蛋白表达,免疫细胞化学法检测Beclin-1和P62蛋白表达,乳酸脱氢酶检测法检测细胞LDH释放率以及死亡率。结果:1.HE染色结果:在HG 33 mmol/L基础上,分别以250、500、1000μmol/L浓度HL处理H9C2细胞,时间梯度12h、24h、36h和48h,显示500μmol/L处理36h时细胞面积达到最大,并出现肥大病理特征,以此确定造模浓度和时间。2.CCK-8结果:与模型组相比,0.5-5 mmol/L浓度的葛根素处理细胞36h均可提高细胞的增殖活力(P<0.05);葛根素干预浓度为1 mmol/L时增殖活力最高(P<0.05),随后细胞的增殖活力开始呈下调趋势。3.Western Blot结果:与对照组相比,模型组Cleaved Caspase-3表达水平显著增加(P<0.01);与模型组相比,葛根素组Cleaved Caspase-3表达量下降(P<0.05)。相较于正常组,模型组LC3Ⅱ、Beclin-1显著降低(P<0.05),而p62蛋白水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,氯喹组LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达显著降低(P<0.05),P62蛋白水平升高(P<0.05);雷帕霉素组、葛根素组的LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白显著升高(P﹤0.05),而p62蛋白水平显著降低(P<0.05)。4.乳酸脱氢酶结果:与正常组比较,模型组和氯喹组LDH明显增多(P<0.05),细胞死亡率升高(P<0.05)。与模型组相比,雷帕霉素组、葛根素组LDH释放率降低,细胞死亡率降低(P<0.05)。5.细胞免疫组化结果:模型组Beclin-1显著降低(P<0.05),而p62蛋白水平显著升高(P<0.05);葛根素组的Beclin-1蛋白显著升高(P<0.05),而p62蛋白水平显著降低(P<0.05)结论:葛根素对高糖高脂诱导的H9C2心肌细胞肥大有抑制作用,其机制可能与其上调LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达,降低p62蛋白表达和减少LDH释放有关。