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目的观察斑蝥素(Cantharidin)对胰腺癌细胞系PANC-1,CFPAC-1生长的抑制作用,探讨斑蝥素在胰腺癌治疗中的应用价值。方法用斑蝥素处理PANC-1,CFPAC-1细胞,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长能力;通过平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;通过流式细胞术检测细胞的细胞周期分布和凋亡水平;通过RT-PCR,Western blot检测Cantharidin对周期和凋亡相关基因表达的调控。结果MTT表明随斑蝥素浓度和作用时间增长对胰腺癌细胞系PANC-1,CFPAC-1生长抑制作用增强(P<0.01)。斑蝥素作用后PANC-1克隆形成能力从未经处理的61.00%降到28.00%,差异有统计学意义(P<0.01)。斑蝥素作用后CFPAC-1克隆形成能力从未经处理的38.00%降到10.00%,差异有统计学意义(P<0.01)。10μmol/L斑蝥素48h处理后细胞G2/M期的比率PANC-1从未经处理的(16.47?1.66%)增加到(42.71?3.64%),CFPAC从未经处理的(15.30?0.72%)增加到(25.26?3.14%)差异有统计学意义(P<0.01),表明斑蝥素使细胞周期阻滞在G2/M期。10μmol/L斑蝥素作用24h后,PANC-1细胞凋亡率(24.89?4.80%)较未处理组(7.35?2.44%)明显增加(P<0.01),CFPAC-1细胞凋亡率(24.70 ?1.92%)较未处理组(6.39?3.95%)明显增加(P<0.01),表明斑蝥素诱导细胞凋亡。与G2/M期调控相关的CDK1表达下调,p21表达上调。促凋亡基因TNF-α, TRAILR1, TRAILR2, Bad, Bak和Bid表达增加,抗凋亡基因Bcl-2表达减少。结论斑蝥素对胰腺癌细胞的生长和侵袭具有显著的抑制作用,有望成为胰腺癌的有效治疗药物。目的:在第一部分研究中发现,PP2A抑制剂斑蝥素(Cantharidin)对胰腺癌细胞的生长有显著抑制作用,具体机制尚不清楚。IKK (IκB kinase)是NF-κB信号通路的上游激酶,PP2A可使IKK去磷酸化而失活,斑蝥素作为PP2A抑制剂可促进IKK磷酸化而激活NF-κB通路。激活NF-κB通路在某些情况下可诱导凋亡,因此,在本部分研究中,我们拟验证斑蝥素对胰腺癌细胞的凋亡诱导作用是否是通过激活NF-κB通路。方法:通过MTT检测斑蝥素对胰腺癌细胞活力的影响;通过RT-PCR和Western blot检测基因表达水平;通过Western blot和荧光素酶报告基因检测斑蝥素对NF-κB通路的激活作用。结果:斑蝥素(Cantharidin)可导致IKKα持续磷酸化、IκBα磷酸化和降解,以及p65入核,提示斑蝥素可激活胰腺癌细胞NF-?B通路。分别用DN-IKKα(IKKα显性负性突变体)、DN-IκBα(IκBα显性负性突变体)、Bay 11-7082(IκBα磷酸化抑制剂)、p65-shRNA阻断NF-?B通路,削弱了斑蝥素对胰腺癌细胞活力的抑制作用,说明斑蝥素抑制胰腺癌细胞活力是通过NF-?B通路依赖性途径。同时斑蝥素通过激活NF-?B通路选择性地促进了参与外源性凋亡途径的下游基因TNF-α, TRAILR1、TRAILR2的表达。结论:斑蝥素通过NF-κB通路依赖性途径诱导胰腺癌细胞凋亡。