猪源大肠杆菌耐药性调查与I型整合子-基因盒分子流行病学研究

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细菌耐药性问题已经成为全球关注的一个热点。大肠杆菌作为人和动物体内的常在菌,其耐药水平的高低具有一定的代表性。存在于细菌质粒中的整合子结构,能够整合各种耐药基因盒并在同种或不同种细菌间进行水平传播,进而引起细菌耐药性普遍升高和多重耐药日趋严重的现状。因此了解规模化养猪场大肠杆菌的耐药水平,研究Ⅰ型整合子的的类型及其流行状况,分析其耐药基因盒与多重耐药现象之间的关系,为了解细菌耐药性现状,指导临床合理用药以及针对目前耐药现状制定防控措施提供试验依据。   本研究采用微量肉汤稀释法测定159株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性。试验结果表明:159株大肠杆菌对四环素、磺胺异恶唑、新诺明的耐药率最高,为100%;所有菌株对奥格门丁均表现为敏感;而对头孢唑啉、头孢噻呋和多粘菌素的耐药率较低,分别为5.03%(8株)、5.66%(9株)和2.52%(2株)。多重耐药范围为3耐~11耐。其中以7耐为最多,耐药菌株的比例占到24.44%,其次分别为9耐、8耐、6耐、5耐,耐药菌株的比例分别为17.94%、17.15%、12.93%、12.66%。   本试验采用PCR方法调查猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子的流行病学,以扩增出5端的保守序列Ⅰ型整合酶基因(int(I)1基因)为判定存在Ⅰ型整合子的依据。采用PCR方法、PCR产物同源性酶谱分析及直接测序三种方法结合进行耐药基因盒的调查。研究得出:从猪场分离的119株大肠杆菌中,共92株分离菌有Ⅰ型整合子整合酶基因及耐药基因盒插入区扩增片段,检出率达77.31%。92株Ⅰ型整合子携带大肠杆菌共扩增出7类不同大小的基因盒插入区片段,大小分别为1008bp、1318bp、1586bp、1663bp、1913bp、1945bp、3149bp,其中以大小为1008bp的插入区片段的检出率最高为31.67%。而检出率最低的为长度为1318bp的基因盒插入区。将基因盒插入区扩增片段的测序结果与Genebank中的相关序列进行比对,分析其携带基因盒的同源性。试验检测的Ⅰ型整合子携带的耐药基因为aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB、dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27、lnuF、cmlA6、aar-3、orf分别编码对相应药物的耐药性。
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