电针对移植的BMSCs在脑出血大鼠脑内分化影响的研究

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目的:观察电针对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后移植的外源性骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)分化的影响。方法:通过脑立体定位仪向成年SD大鼠脑内尾壳核(Caudate-Putamen)注射胶原酶和肝素钠建立ICH动物模型,在模型建立后的第3天,选择神经功能评分(Neurological Severity Score,NSS)超过9分的SD大鼠并随机分为生理盐水对照组(NS组)、BMSCs移植组(BMSCs组)和BMSCs移植结合电针刺激治疗组(EABMSCs组)三组。然后把生理盐水、等量BMSCs分别移植到NS组、BMSCs组和EA BMSCs组SD大鼠的ICH部位;移植2h后在EABMSCs组SD大鼠的百会穴、大椎穴给与电针刺激,以后每天一次,直至SD大鼠被处死为止。按照注射生理盐水或进行细胞移植后各组SD大鼠的再喂养时间不同(1d、3d、5d、7d、14d),把每组的SD大鼠都分成五个亚组,每个亚组5只SD大鼠。在动物模型建立2h后开始对各实验组的SD大鼠进行NSS评分并记录,以后每天一次直至处死。然后灌注取脑、冰冻切片及免疫组化染色,最后利用荧光显微镜观察外源性BMSCs在ICH的SD大鼠脑内的分布与分化情况。结果:在建模后移植前同一时间点各实验组(NS组、BMSCs组、EABMSCs组)之间,各SD大鼠的NSS评分差异无统计学意义。在移植后同一时间点(1d、3d除外)BMSCs组SD大鼠的NSS评分低于生理盐水组SD大鼠的NSS评分,差异具有统计学意义,p<0.05;同一时间点(1d除外)EA BMSCs组SD大鼠的NSS评分低于BMSCs组SD大鼠的NSS评分,差异具有统计学意义,p<0.05;同一实验组后一时间点SD大鼠的NSS评分均低于前一时间点SD大鼠的NSS评分,差异具有统计学意义,p<0.05。外源性BMSCs移植进入到ICH大鼠尾壳核处后,随着时间的推移,在纹状体、胼胝体、背侧丘脑以及大脑皮层都可见被绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)标记的外源性BMSCs分化而来的表达胶质细胞原纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein, GFAP)的星形胶质细胞和表达神经丝蛋白-200(Neurofilament- 200, NF-200)的成熟的神经元样细胞。结论:外源性BMSCs移植联合电针刺激较单纯BMSCs移植更能改善ICH后SD大鼠神经功能缺失症状,其机制可能是电针有助于促进外源性BMSCs向神经元样细胞、星形胶质细胞的分化,替代原来受损的神经细胞,完成一定的神经组织结构修复和环境重建。
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