哮喘大鼠血清褪黑素及海马褪黑素受体1的变化

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目的检测哮喘大鼠血清褪黑素水平及海马组织褪黑素受体1(Melatonin Receptor1,MT1)表达的变化,并探讨其在哮喘发生发展过程中的的作用和可能的神经保护及神经免疫调节机制。方法60只健康SD大鼠按随机原则分为对照组(20只)、哮喘组(40只)。其中,对照组随机分为2组,每组10只,均于建模第17天取材,10只用于免疫印迹、逆转录PCR及血清褪黑素检测,10只用于免疫组织化学检测。哮喘组随机分4组,每组10只:分别用于建模第5天、10天、17天取材以行免疫印迹、RT-PCR及血清褪黑素检查的三组(Day5,Day10,Day17),及于第17天取材行免疫组织化学检测的一组。通过卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏、激发,建立哮喘大鼠模型,采用ELISA方法测定血清褪黑素水平的变化,应用免疫组织化学法、RT-PCR及蛋白免疫印迹技术,检测不同时期哮喘组及对照组大鼠海马组织MT1的表达。结果1.成功复制哮喘大鼠模型,大鼠哮喘发作时呼吸急促,烦躁不安,腹肌收缩和跌倒,可闻及喉间喘鸣音;对照组大鼠无明显上述表现。2.通过酶联免疫吸附法检测,哮喘组大鼠外周褪黑素水平较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在哮喘组中,与哮喘第5及10天比较,第17天大鼠血清褪黑素浓度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);而哮喘组第5天与第10天间褪黑素浓度无显著差异,差异无统计学意义(P>0.05)。3.通过免疫组化检测,哮喘组与对照组大鼠海马组织中MT1表达均成阳性,哮喘组MT1表达较对照组明显增强。CA1-CA3中MT1阳性的细胞主要集中于三角形胞体中;齿状回中MT1阳性的细胞多位于颗粒层下方的多形细胞层,多位于椭圆形或双极性的胞体。4.通过RT-PCR及Western Blots技术检测,与对照组比较,哮喘组大鼠海马组织MT1基因和蛋白水平的表达均明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。在哮喘组中,与哮喘第5及10天比较,第17天大鼠海马组织MT1表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);而哮喘组第5天与第10天间MT1表达无显著性差异,差异无统计学意义(P>0.05)。结论褪黑素及海马MT1可能参与哮喘的发病机制。在哮喘的发生发展过程中,大鼠海马组织MT1在基因和蛋白水平的表达上调呈时间依赖性,与外周褪黑素水平的下降趋势相反。海马MT1的过表达可能是机体应对血清褪黑素水平降低的一种适应性代偿,在哮喘炎症反应和免疫应激过程中发挥神经保护和中枢免疫调节作用。
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