猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia，PCP)，是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起的猪的一种高度接触传染性呼吸道疾病，给世界各地的养猪业造成了巨大的经济损失。大量研究工作证实，APP产生的溶血外毒素是其最重要的毒力因子和主要的保护性抗原，而只有毒素四(ApxⅣ)是所有15个血清型都分泌的，因此对其进行研究具有很重要的意义。本试验旨在应用分子生物学技术，对编码ApxⅣ3’-端的ApxⅣA部分基因片段在原核系统中进行表达，初步建立间接ApxⅣA3-ELISA方法，为猪传染性胸膜肺炎的新型诊断方法的建立奠定基础。本试验以提取的猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株基因组DNA为模板，用PCR方法扩增出ApxⅣA3特异性基因片段，PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化，经酶切及序列分析鉴定后，亚克隆到原核表达载体pET-28a中，构建成重组表达质粒pET-ApxⅣA3，序列分析结果表明：Hpn-405菌株与标准8型基因同源性达99.8％。将重组表达质粒pET-ApxⅣA3转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中，以IPTG进行诱导重组蛋白的表达，SDS-PAGE检测结果显示，表达的融合蛋白分子质量约为18Ku，与预期片段大小相符；将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实，该融合蛋白具有免疫学活性。在经过变性、复性及纯化后，将pET-ApxⅣA3融合蛋白作为抗原，以APP感染猪阳性血清作为抗体初步建立了间接ApxⅣA3-ELISA方法，结果证明pET-ApxⅣA3融合蛋白可以特异的与感染猪血清结合，而和免疫猪血清和阴性猪血清无论抗原抗体何种浓度都不能发生反应，说明pET-ApxⅣA3融合蛋白具有很好种特异性和生物学活性，可以用于胸膜肺炎感染的鉴定及区分感染猪和免疫猪，有很好的应用前景。