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本课题前期研究结果表明:从夏枯草中分离得到的五个多糖组分(XKC00、XKCO2-A、XKC02-B、XKC05、XKC10)在一定浓度下均可减轻HSV感染引起的细胞致变作用(cytopathic effect,CPE),同时具促进淋巴细胞转化增殖及诱导γ-干扰素产生等提高免疫的作用,提示了夏枯草多糖抗HSV的开发前景。
本论文在前期研究工作基础上,重点研究夏枯草多糖分离纯化工艺及主要药效学,多糖温敏凝胶制剂制剂,药材、多糖及其制剂的质量标准,并完成了制剂初步稳定性研究,为开发治疗HSV感染的外用新剂型——夏枯草多糖温敏凝胶提供了药学研究资料。
通过研究获得结果如下:
1、通过对柱分离洗脱溶剂强度、收集段范围及透析袋规格等影响因素的研究,确定了夏枯草多糖的分离纯化工艺方法。该方法如下:
粗多糖加水使充分溶解(1500ml水/100g粗多糖),用玻璃纸(截留值约 3500Da)流水透析48h,透析内液离心,弃不溶物,上清液浓缩至约生药:药液(1:1),低温离心(15000r/min,20min),上清液作为上柱供试液上样于 DEAE-sepharose F.F.柱(上样体积约为200ml,固体含量约为5.0g),用0.5mol/L NaCl溶液洗脱,收集糖反应阳性较强洗脱液(硫酸-苯酚法检测)约1000ml,50℃旋转蒸发浓缩,装透析袋(截留值3500 Da)用蒸馏水透析48h,透析内液50℃旋转蒸发浓缩,冷冻干燥,即得夏枯草多糖。
2、抗疱疹病毒体外主要药效学研究表明,夏枯草多糖200μg/ml浓度以上时既具一定抗病毒作用,又具较强的促进淋巴细胞转化增值及诱生γ-干扰素等增强免疫的作用。
3、通过建立32℃下温敏凝胶相变时间的对数-相变温度(lgt-T)曲线,对不同基质、不同配比处方进行筛选,最终确定夏枯草多糖温敏凝胶处方组成为:P407(17%)、P188(1%)、XKC多糖(2%)、0.02%苯扎溴铵水溶液(80%)。成型方式为:以含0.02%的抑菌剂苯扎溴铵溶液为溶剂,分别用溶剂总量的40%、60%将多糖及基质配成一定浓度的溶液,再于低温(4℃)下混匀,即得。
4、采用无膜溶出模型对夏枯草多糖温敏凝胶进行体外释放实验,研究结果表明:制剂中夏枯草多糖释放符合零级动力学规律,为恒速释放过程,夏枯草多糖释放与多糖性质无关,只与凝胶溶蚀有关。同时凝胶中多糖的释放、凝胶的溶蚀与环境温度、释放介质接触面积等因素有关,并存在一定规律性。此外,对于相变温度相近但基质组成不同的温敏凝胶在固定温度下的体外释放结果表明:PVP、PEG6000的加入将加速凝胶的溶蚀、多糖的释放,速率大小为P407/PVP>P407/PEG6000>P407/P188。
5、制定了夏枯草药材、多糖及其制剂的质量标准,并完成了制剂初步稳定性实验,研究结果表明:本品经室温下贮存三个月,各项指标检查均符合规定,制剂稳定。