基于点亮型适配体的RNA成像及功能调控

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RNA作为细胞体内遗传信息传递的重要小分子,参与了许多细胞内生理活动,然后对于探究细胞内RNA的功能以及其动力学研究仍有很大的挑战,常规的检测手段通常有高背景,低灵敏度,细胞毒性大等缺点,因此设计一种能有助于RNA体内成像的优异的工具是许多科研人员研究的方向,荧光探针作为现代科学中用于微观层面检测小分子的重要手段,特别是有机荧光探针,具有可编辑性,可以通过在染料有机小分子结构上改变其官能团的位置以及结构从而改变其光学性质。另一方面,适配体作为一种单链的DNA或RNA序列,其能形成二级或是三级结构特异性结合靶标分子,自提出以来,已在生化分析、生物传感、药物发现等领域取得多个重要成果。PDT(光动力学治疗)已被公认为癌症治疗的一种先进手段,与传统疗法比起来具有一系列的优势,PDT治疗中,肿瘤细胞能被ROS(活性氧)杀伤从而达到治疗的效果,并且由于ROS具有高反应性以及短寿命的性质,该治疗方法具有高度局部效应,不会对周围的健康细胞产生大范围损伤,因此借助荧光探针构建一种新型的ROS光敏剂有助于新型癌症治疗的研究。本论文主要开展了以下工作:1.某些特定的适配体结构能与有机荧光探针进行特异性结合,因此本文中基于这一原理设计了两种猝灭型荧光探针,分别可以与不同的适配体结合,一种是基于接触性猝灭的荧光探针异硫氰酸荧光素-二硝基氟苯共轭物(FITC-DN),另一种是基于斯托克位移型猝灭的荧光探针磺化罗丹明-黑洞猝灭基团共轭物(SRBHQ1)。然后对其进行了吸收光谱和荧光光谱分析,最后,通过使用两种基于RNA适配体构建的质粒对细胞进行转染,能够同时对两种不同的核酸适配体进行细胞成像。双通道的荧光成像为研究不同的RNA分子之间的相互作用提供了思路。2,在有机荧光探针的结构上引入重原子可以在特定光照条件下产生活性氧,因此我们设计了一种基于罗丹明结构的猝灭性荧光探针含碘罗丹明-二硝基氟苯共轭物(SR-2I-DN),希望通过引入适配体SRB与DNB,探究与SR-2I-DN结合后荧光信号的变化以及ROS产生速率的变化。结果表明,当SR-2I-DN自身荧光猝灭的情况下产生大量的活性氧,但是当与适配体结合后,荧光信号恢复但是活性氧的产生效率下降,通过适配体调控功能型探针还需要进一步优化。
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