ANIH对直肠癌根治术患者围术期NK细胞、NKT细胞和Th1/Th2的影响

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[目的]本课题通过观察术前急性非等容性血液稀释(ANIH)对于直肠癌根治术患者围术期NK细胞数量和毒性功能、NKT细胞数量及Th1/Th2细胞因子比值的影响,为寻求保护和改善围术期自身细胞免疫功能的血液保护方法提供依据。[方法]选择拟行直肠癌根治术(mile’s)病人40例,年龄50-75岁,体重45-70kg,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,Dukes分期B或C期,无严重心脑血管及内分泌疾病,无免疫系统疾病,无放疗、化疗和激素治疗史。患者术前Hct>35%,预计术中失血量<800 ml。随机均分为2组(n=20):常规输液组(Ⅰ组)和急性非等容性血液稀释组(Acute Non-normovolemicHemodilution, ANIH)(Ⅱ组)。2组患者采用相同的麻醉方法和术后镇痛,术中均以5-7ml/(kg·h)的速率输注复方电解质注射液以补充生理需要量和第三间隙损失量。Ⅰ组:不输异体血,常规输液,手术结束前以等量4%琥珀酰明胶注射液(商品名:佳乐施,贝朗医疗苏州有限公司)补充丢失血液;Ⅱ组:于麻醉诱导前经桡动脉采血,以ACD集血袋收集保存,采血量为400-600 ml(相当于血容量的10%-15%),采血后以50ml/min速率输入4%琥珀酰明胶注射液1000-1200 ml,并用Masimo Radical-7碳氧脉搏血氧仪无创连续监测患者总血红蛋白(SpHb)和末梢灌注变异指数(PVI),了解血液稀释前后血容量和血红蛋白的变化情况,于手术结束前或SpHb<8.0g/dL时予以自体血回输。2组患者如术中输入异体血则排除研究。所有患者分别于麻醉前1天、术后第1天、第3天、第7天抽取外周静脉血,置于抗凝试管中混匀,以EPICS XL流式细胞仪(Beckman Coulter公司,美国)检测外周血单核细胞中NK细胞数量和细胞毒性功能、NKT细胞数量、血清Thl型细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-4.IL-10的浓度,并计算Th1/Th2型细胞因子比值(Th1/Th2)[Th1/Th2=(IL-2+IFN-γ) ÷(IL-4+IL-10)],观察直肠癌根治术患者自身细胞免疫功能的变化情况。[结果]两组患者在年龄、身高、体重、性别比、手术时间、麻醉ASA分级及直肠癌Dukes分期上的差异均无统计学意义(p>0.05),但手术期间ANIH组的输液量多于输液组(p<0.05)。NK细胞数量的变化:与T1时比较,T2时Ⅰ组和Ⅱ组有所上升,但无显著性差异(p>0.05)。T3时Ⅱ组明显增高,与Ⅰ组比存在显著性差异(p<0.05)。与T3时相比,T4时两组都有明显减少(p<0.05),且Ⅰ组减少的程度大于Ⅱ组,组间存在显著性差异(p<0.05)。NK细胞毒性功能的变化:与T1时比较,T2时两组均有所减少,且Ⅰ组减少更为明显(p<0.01),与Ⅱ组相比存在显著性差异(p<0.05)。T3时两组均显著增加,与T1、T2时比较存在显著性差异(P<0.05),且Ⅱ组更为明显,与Ⅰ组比存在显著性差异(p<0.05)。T4时两组基本恢复到T1时水平,组间无显著性差异(p>0.05).NKT细胞的变化:与T2时比较,T3时两组患者都明显增高(p<0.05),且Ⅱ组较为明显,与Ⅰ组相比存在显著性差异(p<0.05)。与T3时相比,T4时Ⅱ组减少较为明显(p<0.01),组间无显著性差异(p>0.05)。Th1/Th2型细胞因子比值的变化:与T1时相比,Ⅱ组在T2时有所降低(p<0.01),到T3、T4时就开始出现上升趋势(p<0.05),但在各时间点,两组都不存在显著性差异(p>0.05)。[结论]急性非等容性血液稀释与常规输液相比可以提高直肠癌根治术患者围术期NK和NKT细胞数量,增强NK细胞毒性功能,不影响Th1/Th2型细胞因子的平衡,保护了机体自身细胞免疫功能,有利于抗肿瘤免疫,可以作为一种改善直肠癌根治术患者围术期自身细胞免疫功能的有效的血液保护方法。
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