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核心蛋白聚糖（decorin,DCN）为蛋白聚糖（proteoglycan,PG）的一种,是一种多效性分子。在调节细胞粘附、迁徙、增殖、胶原纤维形成及调节TGF-β活性中起重要作用,因而可抗组织纤维化及抑制肿瘤生长。人DCN（human decorin,hDCN）基因外显子序列长1080bp,编码395个氨基酸。目的建立hDCN的pcDNA3.1（+）真核表达载体,通过脂质体将重组质粒转染入肿瘤细胞后,用流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡指数,同时在小鼠体内进行DCN抑瘤实验的初步研究。方法1.用PCR法扩增出hDCN分子编码序列的cDNA全长,与pcDNA3.1（+）载体连接,构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-DCN,并转入DH5α进行测序鉴定;2.将序列正确的pcDNA3.1（+）-DCN大量纯化扩增后,通过脂质体转染法转入小鼠肿瘤细胞S180中,然后用不同浓度的G418筛选阳性克隆细胞,提取阳性克隆细胞的RNA,并进行RT-PCR鉴定;3.用流式细胞仪对转染了重组质粒pcDNA3.1（+）-DCN、空质粒pcDNA3.1（+）的S180细胞和未转染的S180细胞进行细胞凋亡检测和细胞周期分析;4.分别注射等量的pcDNA3.1（+）-DCN/S180、pcDNA3.1（+）/S180和S180细胞到随机分组的小鼠腋部皮下,观察三组小鼠的肿瘤生长情况;5.处死三组小鼠后,分别剥离肿瘤组织做病理切片鉴定。结果1.扩增出的hDCN片段测序的结果,与GenBank中的DCN基因序列相比,序列完全一致,无突变;2.构建了重组质粒pcDNA3.1（+）-DCN,通过脂质体转染法将其转入S180细胞后,筛选出抗高浓度（900μg/ml）G418的阳性克隆,并用RT-PCR法进行鉴定;3.流式细胞仪检测转染pcDNA3.1（+）-DCN的S180细胞凋亡率明显高于转染pcDNA3.1（+）的S180细胞和未转染的S180细胞,且其G0/G1期细胞百分率明显高于后两组,G2/M期和S期细胞百分率明显低于后两组,三组间差异存在统计学意义（P＜0.05）;4.大量培养转染阳性克隆细胞,将其注入小鼠体内,同时选择未转染的S180细胞和转染pcDNA3.1（+）的S180细胞注入小鼠作为对照组,结果显示注射pcDNA3.1（+）-DCN/S180的小鼠肿瘤生长明显慢于注射S180和pcDNA3.1（+）/S180的小鼠,三组间差异存在统计学意义（P＜0.05）;5.三组病理切片均可见肿瘤细胞增殖,且pcDNA3.1（+）-DCN/S180组增殖不如pcDNA3.1（+）/S180组和S180组活跃,但其肿瘤组织内炎性细胞浸润明显多于后两组。结论成功构建了hDCN的真核表达载体,并用脂质体转染法将其转入肿瘤细胞,可促使肿瘤细胞发生凋亡,动物体内初步实验发现与注射pcDNA3.1（+）/S180和S180的小鼠相比,注射pcDNA3.1（+）-DCN/S180的小鼠肿瘤生长速度减慢。