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研究背景:胰腺癌作为一种起病隐匿,进展迅速、预后极差的恶性消化道肿瘤,严重威胁着患者的生命健康。虽然在过去的几十年中,大多数肿瘤患者5年生存率有所提高,但遗憾的是,胰腺癌患者的5年生存率仍然很低,并没有取得明显的治疗效果。只有少数局部可切除的胰腺癌患者的病情是能被控制的,但仅占5-10%。总体来看,胰腺癌患者5年生存率仅为8%。面对这样的困境,我们应该不断加强对胰腺癌的研究,不断尝试任何一种可能提高胰腺癌患者生存率的方法。在胰腺癌发生发展过程中,许多信号通路起着重要的作用,尤其在胰腺癌恶性生物学行为方面发挥重要作用,如K-Ras通路、JNK通路、Hedgehog通路、Wnt/Notch通路等。作为Wnt通路分裂蛋白家族中转导素样增强子的一员,TLE1是一些转录因子的抑制子,不仅作用于生长发育过程中,而且还在肿瘤的发生、侵袭和转移等恶性生物学行为中发挥重要作用。遗憾的是,当前对TLE1在肿瘤发生发展过程中的具体机制,并没有深入的研究。目前还没有相关论文探究TLE1和胰腺癌之间的相互作用以及TLE1与预后随访之间的关系。因此,探究TLE1和胰腺癌之间的相互关系,对胰腺癌细胞恶性生物学行为具体机制的研究与预后价值的评估有着重要的意义,也为胰腺癌的治疗探索了新的靶点。研究目的:1)观察TLE1对胰腺导管腺癌细胞迁移、增殖和细胞周期等表型的影响;2)了解TLE1在胰腺导管腺癌细胞迁移、增殖和细胞周期的作用机制;3)分析TLE1对胰腺癌术后患者的预后评估价值。研究方法:1)利用转染试剂将TLE1沉默和过表达质粒导入胰腺导管腺癌细胞MiaPaCa-2和T3M4 中;2)划痕实验和Transwell实验确定各组细胞的迁移能力,CCK-8法观察各组细胞的增殖能力,PI法观察细胞的周期,Western Blot检测EMT和细胞周期标志性蛋白的表达;3)收集瞬时转染细胞株的RNA,进行转录组测序并分析测序结果;4)采用免疫组织化学染色的方法评估TLE1在胰腺癌术后患者中的预后价值。研究结果:1)体外划痕实验显示,无论是在MiaPaCa-2还是T3M4中,敲低组划痕的愈合速度较对照组显著缩短,而在过表达组和对照组的比较中,过表达组划痕的愈合时间较对照组显著增加。在Transwell迁移实验中,上调MiaPaCa-2和T3M4中TLE1的表达可以抑制胰腺癌细胞的迁移,而敲低TLE1的表达则两株细胞的迁移能力增强。2)对EMT通路标志性蛋白分子检测结果显示,在敲低组中,无论是MiaPaCa-2还是T3M4细胞系,N-Cadherin和Vimentin都是表达量增多,而TLE1和E-Cadherin则是表达量下降的。而在过表达组中,则得出相反结论。3)CCK-8法增殖实验结果显示,对于MiaPaCa-2细胞株,沉默组的增殖率远远大于正常对照组;从第2天开始,两组细胞增殖率出现差异(P<0.05);在过表达组和对照组的比较中,两组细胞增殖率也出现统计学差异(P<0.05),但过表达组的增殖率低于正常对照组。而对于T3M4细胞株,无论是沉默组还是过表达组,其细胞增殖率均低于相对应的MiaPaCa-2细胞株。但增殖表型的表现与MiaPaCa-2一样。4)利用PI法对细胞周期进行分析显示,在MiaPaCa-2和T3M4中,过表达TLE1导致细胞停留在 G0/G1 期(MiaPaCa-2:83.12±1.22 vs 88.4±1.60,P=0.011;T3M4:57.33±3.16 vs 69.48±2.69,P=0.007),而 S 期细胞则在下降(MiaPaCa-2:8.81±0.14 vs 7.01±0.78,P=0.018;T3M4:37.01±3.37 vs 21.27±3.90,P=0.007)。而在敲低沉默组中,情况则相反。对细胞周期标志性蛋白进行检测发现,过表达TLE1蛋白会使MiaPaCa-2、T3M4细胞系的G1/S期的标志蛋白cyclinDl减少以及G2/M期的标志蛋白cyclin B1和cyclin A表达下降。而对于敲低的两株细胞系,则会使cyclin D1增加和cyclin B1、cyclin A表达上升。5)对人胰腺癌患者术后组织标本的免疫组化研究发现,TLE1在胰腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.001),且和年龄(P=0.003)、是否饮酒(P=0.045)、皮肤巩膜是否黄染(P=0.034)、分化程度(P=0.005)有关。研究结论:1)TLE1抑制胰腺癌细胞的迁移和增殖,阻滞胰腺癌细胞有丝分裂周期的进行,呈现抑癌的功能。2)TLE1通过上调E-Cadherin来抑制EMT的转化,从而抑制胰腺癌细胞的迁移。3)TLE1通过阻滞G1/S期和G2/M期的进行,影响细胞的有丝分裂,从而抑制胰腺癌细胞的增殖。4)TLE1免疫组化表达高低和胰腺导管腺癌患者总体生存期长短之间没有相关性。5)胰腺导管腺癌中TLE1蛋白的表达与年龄、是否饮酒、是否皮肤巩膜黄染、肿瘤分化程度之间有相关性。6)是否有胰腺癌家族史、是否体重下降、肿瘤分化程度、是否淋巴结转移是影响预后的危险因素,其中是否有体重下降、肿瘤分化程度以及是否有淋巴结侵犯是影响胰腺癌患者预后的独立的危险因素。