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成纤维细胞生长因子8(Fibroblast．growth factor 8，FGF8)是最初从一种小鼠雄激素依赖性乳腺癌细胞系SC-3的培养液中分离出来的成纤维细胞生长因子家族的成员，与FGF18和FGF17属于同一个亚家族。研究证实FGF8是一种组织发育过程中的重要分泌性信号分子，参与多种组织的发育，尤其在脑等外胚层器官的发育过程中起了重要作用。此外，FGF8能有效促进组织损伤的修复，在神经干细胞培养过程也起重要的诱导作用。
本研究以草鱼为实验对象，运用了逆转录PCR结合RACE方法克隆草鱼FGF8 cDNA序列，并运用生物信息学手段对其进行分析，旨在揭示鱼类疾病的病理机制、了解草鱼胚胎发育过程中的细胞生长、组织形成的生理调控机理。经：PCR条件的优化，最终克隆出了草鱼成纤维细胞生长因子-8(FGF8)的cDNA序列，并对其进行深入的分析。
1．从草鱼脑中提取总RNA。以总RNA为模板，利用AMV反转录酶和试剂盒自带的oligodT-3 sites Adaptor primer为引物，合成第一链cDNA。接下来的PCR反应中，以第一链cDNA为模板，人工合成的寡聚核苷酸引物为引物，用Taq DNA聚合酶进行扩增反应。反应条件为94℃变性60 see，48℃退火60 see，72℃延伸90 see，反应40循环。PCR扩增产物转化进大肠杆菌(DH5a)中，用于测序。结果显示，草鱼成纤维细胞生长因子-8 cDNA序列长度为887 bp，包括一个长度为100个核苷酸的5’非编码区序列(．5UTR)，起始密码子(ATG)、编码210个氨基酸的开放阅读框(ORF)、终止密码子(TGA)和一个包括加尾信号(AATAAA)、poly(A)信号的3非编码区序列(3UTR)，3非编码区长度为97个核苷酸。编码区核苷酸长度为687 bp。经同源性比较分析，可以确定实验结果为FGF8 cDNA序列。
2．草鱼FGF8编码的氨基酸多肽链全长210个氨基酸，包含40个碱性氨基酸、16个酸性氨基酸。草鱼FGF8蛋白质的N端区域包含一个氨基酸序列为MRLIPSRLSYLFLFAFCYYA的信号肽，切割位点在Ala22和Gln23之间。蛋白质N-末端的信号肽被认为是分泌蛋白的明显特征，提示草鱼FGF8蛋白是分泌蛋白。氨基酸的一级结构中在Asn37和Asn136氨基酸位点出现N-糖基化结构，分别为Asn-Phe-Thr和Asn-Tyr-Thr。草鱼FGF8推导蛋白的分子量Mw=24.68 kDa，等电点pI=10.93。其二级结构包含a-螺旋、β-转角、β-折叠、随机卷曲等结构形式。从分析图中可以看出，β-折叠的比例比较高，其次是α-螺旋，β-转角、随机卷曲含量最少。
3．系统发育进化树分析显示，鲤科鱼类的FGF8蛋白很相似，斑马鱼、墨西哥脂鲤两种鲤科鱼类的FGF8蛋白均含有210个氨基酸，同源性97.1％。本实验克隆的草鱼FGF8蛋白也具有210个氨基酸，与上述两个鲤科鱼类的FGF8氨基酸序列同源性达到97％以上。此外，草鱼FGF8蛋白与其他物种也有很高的同源性，如与鸡、斑点火蜥蜴、热带巨蜥、蝾螈的FGF8氨基酸序列的同源性较高，分别为82.4％、86.1％、82.9％、81.0％，与被囊动物海鞘FGF8氨基酸序列的同源性最低，只有28.2％。这些结果说明鲤科鱼类FGF8在进化过程中保持高度保守性。