论文部分内容阅读
第一部分癫痫发生不同时期髓鞘及少突胶质细胞的动态变化目的：探索大鼠癫痫发生不同时期海马内髓鞘及少突胶质细胞的动态变化。方法：选用成年SD大鼠106只,分为正常对照组16只，实验组90只。实验组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导惊厥持续状态（StatusConvulsion,SC），利用视频联合无线遥测脑电监测SC后癫痫发生不同时期脑电图变化;采用免疫荧光染色检测SC后癫痫发生不同时期大鼠海马髓鞘蛋白MBP的形态变化；免疫荧光染色成熟少突胶质细胞标记物CC1,观察成熟少突胶质细胞数目变化；western blot测定SC后癫痫发生不同时期海马内髓鞘蛋白MBP及CNPase含量变化。结果：(1)大鼠SC后不同时期脑电图改变符合癫痫发生不同时期脑电图改变；(2)大鼠海马MBP、CNPase表达在SC后癫痫发生的过程中呈现动态变化，在癫痫形成的急性期MBP、CNPase表达即开始下降(P<0.01)，并于SC后癫痫发生潜伏期、慢性期及慢性晚期均显著低于正常对照组，并呈进行性下降趋势（P<0.01）；（3）大鼠SC后癫痫发生急性期CC1阳性细胞数目开始下降(P<0.01)，SC后癫痫发生潜伏期、慢性期及慢性晚期均显著低于正常对照组（P<0.01），与MBP、CNPase呈一致性变化。结论：SC后癫痫发生不同时期髓鞘及少突胶质细胞持续受损，该损伤贯彻于癫痫发生整个过程。第二部分少突胶质前体细胞在SC后癫痫发生中的作用目的：探索大鼠癫痫发生过程中少突胶质前体细胞及其调控因子的变化。方法：选用成年SD大鼠，实验组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导惊厥持续状态，应用视频联合无线遥测脑电监测大鼠SC后自发性发作情况。利用免疫荧光染色技术检测NG2蛋白表达情况，了解OPC在癫痫发生不同时期的动态变化；western blot测定PDGFR-α、olig1，olig2在癫痫发生不同时期的动态变化，了解OPC及调控OPC分化的关键转录因子在癫痫发生中的变化情况。结果：（1）OPC在SC后癫痫发生急性期开始活化增值，在癫痫发生潜伏期、癫痫发生慢性期显著高于正常对照组(P<0.01)，在癫痫发生慢性晚期低于正常对照组(P<0.01)。（2）转录因子olig1、olig2在SC后癫痫发生急性期开始升高(P<0.01)，癫痫发生潜伏期达到峰值，随后在癫痫发生慢性期急剧下降，低于正常对照组(P<0.01)，持续到慢性晚期，维持在较低水平。结论：大鼠SC后癫痫发生早期出现OPC的活化，增值能力增强，可能具有修复髓鞘受损的作用；调控OPC增值分化的转录因子olig1、olig2在SC后癫痫发生早期上调可能促进OPC增值分化，参与髓鞘内源性修复，而在慢性期的急剧下降可能是导致髓鞘持续受损的原因之一。第三部分地塞米松在癫痫发生过程中的作用目的：探索地塞米松是否可以通过干预SC后癫痫发生过程中的髓鞘损伤，影响癫痫形成。方法：选用成年SD大鼠68只，随机分为正常对照组，DEX对照组，及实验组。实验组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导惊厥持续状态，SC90分钟后存活的大鼠再随机分为DEX干预组与模型组；DEX干预组于SC90分钟后腹腔给予地塞米松0.5mg/Kg.d,连用4天；DEX对照组采用等量的地塞米松腹腔注射。利用视频联合无线遥测脑电检测SC后各组大鼠癫痫自发性发作情况。在癫痫发生的慢性期采用免疫荧光染色检测各组海马区MBP表达情况；western blot测定MBP、CNPase、PDGFR-α蛋白含量。结果：地塞米松可以延长大鼠癫痫发生的静默期（P<0.05），减少大鼠慢性期SRS次数（P<0.05）；地塞米松对正常大鼠髓鞘、成熟少突胶质细胞及OPC无明显影响（P>0.05）；地塞米松可以提高癫痫发生慢性期大鼠海马髓鞘蛋MBP含量（P<0.05）；地塞米松可以降低慢性期大鼠海马PDGFR-α蛋白含量（P<0.05）、提高CNPase蛋白含量（P<0.05）。结论：地塞米松可能通过促进大鼠海马OPC分化为成熟少突胶质细胞，促进髓鞘修复,进而发挥其在氯化锂-匹罗卡品诱导的癫痫发生过程的抗痫作用。