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自PCR胚胎性别鉴定技术应用以来,显著提高了奶牛场母犊出生率,但该技术需对胚胎切割取样,因而对胚胎造成一定损伤,使其对冷冻的耐受性降低。本实验主要以取样胚胎为对象,通过向常规冷冻液中添加不同浓度的阿拉伯半乳聚糖(arabinogalactan)和聚蔗糖(Ficoll),筛选出适于透明带受损和细胞数量减少的胚胎冷冻液。本研究通过试验一:取样冷冻胚胎二次冷冻-解冻-观察试验、试验二:取样冷冻胚胎二次冷冻-解冻-培养试验、试验三:取样胚胎鲜胚冷冻-解冻-培养试验和试验四:取样胚胎鲜胚冷冻-解冻-移植试验,从阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液和聚蔗糖系列冷冻液中各筛选出一种效果较好的冷冻液(0.03EAS1和0.6EFS1),之后采用这两种冷冻液和对照组EG FREEZE(进口成品乙二醇冷冻液)对体外生产牛胚胎的取样胚和完整胚进行冷冻试验,比较冷冻效果。结果:试验一,通过将各种冷冻液的胚胎回收率、0.5h形态完整率、1h形态完整率、1.5h形态完整率同对照组进行比较,在阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液中,筛选出六种冷冻效果较优秀的冷冻液:0.005EAS1、0.01EAS1、0.02EAS1、0.03EAS1、0.04EAS1、0.05EAS1,四项指标同EG FREEZE比较的结果为:96.67%、96.67%、93.33%、93.33%、93.33%、96.67%vs90.00%;72.41%、65.52%、57.14%、85.71%、75.00%、65.52%vs61.62%;58.62%、55.17%、42.86%、78.57%、71.43%、48.28%vs51.52%;51.72%、41.38%、39.29%、60.71%、67.86%、37.93%vs39.39%。在聚蔗糖系列冷冻液中,筛选出七种冷冻效果较优秀的冷冻液:0.4EFS、0.5EFS、0.6EFS、0.1EFS1、0.2EFS1、0.5EFS1、0.6EFS1,四项指标同EG FREEZE比较的结果为:90.00%、96.77%、90.63%、100.00%、90.00%、80.65%、100.00%vs90.00%;77.78%、56.67%、65.52%、70.00%、88.89%、64.00%、76.67% vs61.62%;70.37%、53.33%、55.17%、56.67%、66.67%、52.00%、60.00%vs51.52%;44.44%、46.67%、41.38%、40.00%、51.85%、40.00%、60.00%vs39.39%。试验二,通过将各种冷冻液的胚胎回收率、培养24h发育率、培养48h发育率同对照组进行比较,在阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液中进一步筛选出两种冷冻液:0.03EAS1和0.04EAS1,三项指标同EG FREEZE比较的结果为:100.00%、70.00%vs75.00%;20.00%、42.86%vs13.33%;30.00%、42.86%vs13.33%。在聚蔗糖系列冷冻液中也进一步筛选出两种冷冻液:0.5EFS和0.6EFS1,三项指标同EG FREEZE比较的结果为:100.00%、36.36%vs75.00%;35.00%、37.50%vs13.33%;40.00%、37.50%vs13.33%。试验三,通过将各种冷冻液的胚胎回收率、培养24h发育率、培养48h发育率同对照组进行比较,得出结果,阿拉伯半乳聚糖系列冷冻液中,0.03EAS1(86.05%vs93.62%、70.27%vs15.91%、81.08%vs22.73%)冷冻效果最好,聚蔗糖系列冷冻液中,0.6EFS1(88.10%vs93.62%、64.86%vs15.91%、70.27%vs22.73%)冷冻效果最好。试验四移植结果同上述相符。体外受精胚胎冷冻-解冻培养试验,通过比较各种冷冻液的胚胎回收率、4h形态完整率、培养24h发育率,得出结果,对取样胚,0.03EAS1(90.00%、55.56%、11.11%)冷冻效果最好,但是对完整胚,EG FREEZE(100.00%、55.56%、22.22%)冷冻效果最好。结论:冷冻液中添加适量阿拉伯半乳聚糖或聚蔗糖,对于取样胚胎,冷冻效果较好,且阿拉伯半乳聚糖优于聚蔗糖;对于完整胚,EG FREEZE冷冻效果较好。