肾癌(Kidney Cancer)为发生在肾脏中的一类恶性疾病,近年来它的发病率不断在上升。早期肾癌诊断存在困难,因为肾脏位于人体隐蔽部位且缺乏肾癌特异性标记物。晚期肾癌的转移性高和抗药性强,使得肾癌治愈率较低且容易复发。因此寻找识别早期肾癌的新型分子探针并发现新的肿瘤分子标志物,将对肾癌的诊断与治疗具有重要意义。核酸适体可通过SELEX技术获得,形成特定的空间结构与靶标结合。核酸适体具有识别靶标范围广、特异性高、低毒性、低免疫原性、结合亲和力强等优良特点在生物医学尤其是癌症相关研究中发挥着重要的作用。目前针对肿瘤相关的蛋白分子和肿瘤细胞,通过蛋白筛选技术以及细胞筛选技术而获得的核酸适体不断增多,在一定程度上为肿瘤研究提供了有效的工具。这两种筛选技术分别针对纯化蛋白和体外培养的癌细胞,所获得的核酸适体极少进行临床应用。组织切片筛选技术(Tissue-SELEX)的筛选针对临床肿瘤组织,获得特异性识别临床肿瘤样本的核酸适体,因而对于癌症早期诊断、治疗、发现新的肿瘤标志物等各方面都有巨大潜力。本论文采用Tissue-SELEX技术,选择临床肾癌组织切片为实验样本,通过全新的经亲和基团修饰的ssDNA文库,利用新的筛选方案开展筛选工作。具体收集单个正筛文库样本、正筛文库与临床肾癌组织孵育样本、正筛文库与肾癌癌旁组织孵育样本、单个负筛文库样本、负筛文库与临床肾癌组织孵育样本、负筛文库与肾癌癌旁组织孵育样本共6组。进行二代测序分析,获得一系列特异性识别临床肾癌组织的核酸适体。并对核酸适体的相关性质开展研究。本论文研究内容具体如下:(1)临床肾癌组织核酸适体筛选基于Tissue-SELEX技术,以临床肾癌组织为靶标,肾癌癌旁组织为对照样本进行筛选,合成具有亲和基团修饰的X-Aptamer文库,经过2轮筛选,设置正筛文库样本、正筛文库与临床肾癌组织孵育样本、正筛文库与肾癌癌旁组织孵育样本、单个负筛文库样本、负筛文库与临床肾癌组织孵育样本、负筛文库与肾癌癌旁组织孵育样本6个实验组与对照组,并对这6组进行二代测序以及对比分析,获得8条获选序列。(2)临床肾癌组织核酸适体WCQ-5的性质考察考虑到核酸适体WCQ-5可能应用到临床诊断与治疗,我们将对核酸适体的性质进行考察。首先我们对候选序列进行二级结构预测,还通过流式细胞检测技术以及激光共聚焦,验证候选序列与肾癌细胞的结合能力,确定特异性结合肾癌细胞的核酸适体WCQ-5。另外,我们还通过亲和性实验考察了WCQ-5与肾癌细胞的解离平衡常数在纳摩尔级别。并且通过检测不同时间点的WCQ-5的电泳条带,发现未经任何修饰的WCQ-5在血清中的稳定性较低。同时,我们通过流式考察了经不同消化处理后的肾癌细胞与核酸适体的结合情况,确定该核酸适体与肾癌细胞的结合靶标类型为膜蛋白。最后,根据核酸适体WCQ-5有内化到细胞中的实验现象,我们通过细胞器荧光探针与Cy-5标记的WCQ-5在786-O细胞中的共定位情况。根据以上研究内容本论文通过Tissue-SELEX技术而得到的核酸适体WCQ-5对786-O等肾癌细胞表现出较强结合能力,这对于肾癌的临床诊断与治疗提供了有力的工具,为实现肾癌的早期诊断与精准治疗带来了希望。