基于损伤范围控制的大鼠胰腺创伤模型建立及其胰腺干细胞增殖规律的研究

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目的:1、研制一种多功能小动物撞击系统并评估其初步使用效果,为进一步动物实验建立创伤模型及为满足创伤基础医学研究提供仪器需要。2、建立一种新型的大鼠单纯胰腺创伤模型,并基于损伤范围评估其伤情变化,为后续研究提供模型条件。3、研究胰腺干细胞在本研究的大鼠胰腺大范围创伤模型中增殖变化规律。方法:1、撞击仪系统基于储能换能装置、简便式多功能撞击装置、撞击参数测量装置等三大部件的相关原理设计,并进一步检验其有效性和稳定性。2、将大鼠随机分为2组,采用自主研发多功能撞击仪的3cm2和6cm2撞击头,分别撞击各组处于开腹状态的胰腺,使之在400kpa的压强下形成对应不等范围的损伤,并设置对照;建模24h后观察各组大鼠存活率、一般情况、大体病理和组织病理学改变,并检测血钾、血钙的浓度和血清、腹水中淀粉酶、脂肪酶的水平。3、将大鼠随机分为创伤组和对照组,前者接受6cm2/400Kpa的撞击强度,后者为假手术组;建模后1、2、3、7天处死大鼠,处死前12h按100mg/kg体重经腹腔注射5-溴-2’脱氧脲嘧啶核苷(Brd U);取胰腺组织,荧光TUNEL检测细胞凋亡,Brd U的免疫组化染色检测细胞增殖,RT-PCR、免疫组化(荧光)和Western blot等方法检测PDX-1的表达并探讨其变化规律。结果:1、多功能小动物撞击系统研制完成,其撞击应力峰值连续可调节且量程在0-200kg,压缩和挤压应力连续可调节且量程在0-100kg;经验证,该仪器具有良好的有效性(P(27)0.05)和可重复性(P(29)0.05)。2、成功构建了大鼠胰腺创伤模型;3cm2和6cm2致伤面积组均能形成明显的损伤,其中致伤组死亡率、腹水量、胰腺湿重、病理评分、血清酶学指标均高于对照组(P(27)0.05),血钾、血钙较对照组低(P(27)0.05),而6cm2致伤面积组的损伤比3cm2组更显著。3、胰腺创伤模型中,伤后24h胰腺即可发生凋亡与代偿性增殖;PDX-1的表达增强主要在建模后的第2-3天,随后下降,至第7天恢复至正常水平附近,伤后第2,3天与同时间点对照组比较,有显著性差异(P(27)0.05)。结论:1、研制的撞击仪操作简单,撞击方式多样,撞击参数可被实时记录;经过调试和动物实验,效果显著且性能稳定,可对不同实验动物形成不同强度和方式的创伤;适用于撞击伤的建模和形态、机能学的研究。2、该胰腺创伤建模简单、模型有效、操作的可重复性好,伤情单一且稳定。适合用于伤情演化机制和创伤施救等研究。3、胰腺创伤后,胰腺干细胞将发生活化,在创伤后修复期增殖并分化为各类功能细胞,一定程度补偿了胰腺受损害的功能。
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