前言:越来越多的证据表明,大肠癌起源于一部分数量很少,有着特殊表型的大肠癌细胞群。这类细胞有自我更新的潜能,能够生成新的异质性肿瘤。这类肿瘤细胞代表了大肠癌的无限制生长,侵袭和转移,免疫逃逸,放疗不敏感,化疗耐药等特点,这一类细胞群被称为肿瘤干细胞(CSC)。在实体肿瘤中,乳腺癌,胶质细胞瘤,直肠癌,前列腺癌,肺癌等几种恶性肿瘤中的肿瘤干细胞已经被成功分离并证明。大肠癌中CD133+表型的细胞被认为是富集大肠癌干细胞的细胞群,它能够反映大肠癌的生物学特点。从人大肠癌癌转移淋巴结和癌性腹水中分离的大肠癌CD133+表型的细胞被确定具有干性。在大肠癌肿瘤细胞中CD133+表型的细胞亚群具有强大的成瘤能力,仅几百个这类细胞就可以在重症免疫缺陷小鼠中产生肿瘤,而注射100倍的不表达同样抗原的其他大肠癌细胞亚群并不能形成肿瘤。越来越多的研究显示,大肠癌干细胞是大肠癌发生和发展的源泉,在大肠癌的治疗中,完全杀灭和消除大肠癌干细胞是彻底治愈大肠癌的关键。本研究目的分离大肠癌干细胞并验证其成瘤能力及其生物学行为特点,为大肠癌的治疗提供依据。大肠癌中CD133+表型的细胞的分离培养,分化,成瘤等生理特征尚存在争论,其所占比率与大肠癌临床病理学特点的关系鲜有报道,这样一群肿瘤细胞和大肠癌临床指标的关系值得进一步探讨。　　 CD133分子是一种跨膜蛋白,定位于细胞膜及细胞质,在各种组织的干细胞或者起始细胞通常都有表达。CD133是人类造血干细胞特异性识别抗原,目前用于从众多的组织中分离干细胞样细胞。虽然CD133的功能是未知的,但是根据初步的证据认为CD133的表达与激活细胞干性相关的信号通路和抗细胞凋亡有关。目前CD133在大肠癌干细胞的生物学行为中所起作用及机制的研究尚鲜有报道,且CD133蛋白的表达水平与大肠癌生物学行为及临床病理特征的关系尚不清楚。应用免疫组化方法对CD133蛋白的表达水平与大肠癌生物学行为及临床病理特征的关系进行研究,以期为大肠癌的治疗提供理论依据。　　 实验材料与方法:　　 一、大肠癌CD133+表型细胞的分离以及其成瘤能力的鉴定　　 应用流式细胞仪分选技术,从大肠癌手术标本中,分离出大肠癌CD133+表型的肿瘤细胞亚群,分析这一类细胞在整个大肠癌肿瘤细胞中所占的比率以及其与临床生物学行为的关系。在免疫缺陷小鼠体内验证大肠癌CD133+表型的肿瘤细胞与其它亚群细胞相比成瘤能力明显增强。　　 二、免疫组织化学染色方法检测CD133的表达　　 通过免疫组化方法分析癌灶中CD133+肿瘤细胞百分比与大肠癌临床病理指标及其预后的关系。　　 三、统计方法　　 所有数据用SPSS13.0统计学软件进行分析。组间比较用X2检验,生存率分析用Kaplan-Meier法计算,生存率比较用Log rank检验,采用COX模型进行预后多因素分析。　　 结果:　　 一、大肠癌CD133+表型细胞在病灶中的比率与临床病理学指标的关系以及其成瘤能力的特点　　 大肠癌CD133+细胞在病灶中的比率0.84％-16.75％,平均含量(7.15±6.50％)。其比率与有无淋巴结转移有关(9.81％vs.3.22％,p=0.013)。大肠癌的组织学分化程度越差,CD133+表型大肠癌细胞富集程度越高(8.32％vs.5.07％,P=0.043)。用流式细胞仪分离出大肠癌HCT116细胞株中CD133+标记亚群细胞5000个细胞接种糖尿病重症免疫缺陷鼠(NOD/SCID鼠)中可生成肿瘤,其余细胞接种106个细胞无肿物生成。用未经过分选的HCT116肿瘤细胞106个细胞接种免疫缺陷小鼠可以成瘤。说明大肠癌中CD133+细胞亚群与其他细胞相比,有更强大的成瘤能力,成瘤能力是未分选肿瘤细胞的100倍以上。　　 二、CD133表达的临床意义　　 大肠癌癌灶中CD133+肿瘤细胞的比率与组织学分级和有无淋巴结转移密切相关。CD133表达阳性患者更容易发生局部复发)和远处转移。CD133+肿瘤细胞的比率≥5％的患者术后生存率与CD133+肿瘤细胞的比率＜5％的患者术后生存率有统计学差异。通过COX回归模型进行分析发现肿瘤浸润深度,组织学类型,病期,淋巴结转移,CD133是大肠癌独立的预后因素。　　 结论:　　 1、大肠癌病灶中存在CD133+表型的细胞亚群,不同病例中的CD133+细胞在大肠癌中的比率有很大差别。大肠癌中CD133+肿瘤细胞比率与大肠癌的进展有一定关系,与大肠癌淋巴结转移情况呈正相关,与组织学分化程度呈负相关。　　 2、大肠癌中CD133+肿瘤细胞在体内实验中有很强的成瘤能力,证明这一细胞群具有干细胞的特征。　　 3、通过本研究提示CD133表达不但与大肠癌的生物学行为密切相关,而且是大肠癌的独立预后因素。