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浙贝母是百合科多年生鳞茎类药用植物,具有清热、润肺、散结、止咳和化痰等功能。宁波市是浙贝母的主产区,田间栽培长期用球茎做种,容易受病菌感染、腐烂,影响产量与品质。本工作建立了一种简单、经济、快速并适合于浙贝母RNA的提取方法,即氯化锂沉淀法。另外异硫氰酸胍、Tris-phenol等方法也能有效地从浙贝母组织中提取出RNA。依据当地常见或者容易侵然百合科的病毒为依据,合成10对引物:首次采用RT-PCR(reverse ttranscription-polymerase chain heaction)对种植区内随机采集的浙贝母的叶片以及离体条件下培养的浙贝母组织进行了病毒检测。RT-PCR检测结果表明,野外的样本携带马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virus)和百合斑驳病毒(Lily Mottle Virus),分别扩增到336 bp和513 bp的特异性条带,与预期的片断大小一致:但是在组织培养的外植体中未发现Potato Leafroll Virus(PLRV)和Lily Mottle Virus(LMoV)。这两种病毒在大田中的分布频率分别为40%和12.5%。 此外,采用双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-D)结合组织培养技术初步分析了被真菌感染的浙贝母球茎的蛋白质表达变化。SDS-PAGE电泳表明,被真菌感染了的浙贝母样本比未感染的浙贝母样本出现了两条明显条带,约为35.0 kDa和25.0 kDa。同时,前者中的三条蛋白质带(分别约30.0,20.0,16.0 kDa)的丰度较后者要低。双向电泳后,经PDQuest软件分析,发现被感染的球茎块与未被感染的球茎在蛋白质表达有明显差异。被真菌感染的样本出现6个新的蛋白质点,而有4个蛋白质点只在未被真菌感染的样本中表达。另外,相对于健康的样本,被真菌感染的浙贝母球茎块,有7个蛋白质点表达量明显升高,而有10个蛋白质点表达量下降。 茯苓(Poria cocos)为常用草药,是多孔菌科真菌茯苓(Poria cocos(schw) Wolf.)的干燥菌核。茯苓多糖具有抑菌,增强免疫力,抑制肿瘤生长和清除自由基等功效。本实验采用口服的方式,初步研究了茯苓多糖对中华鳖(Pelodiscus sinensis)非特异性免疫功能影响的试验结果。试验共分为3个组,在中华鳖饲料中添加20.0 mg/kg.B.W.茯苓多糖作为试验组,将添加500.0 mg/kg.B.W.免疫多糖(酵母细胞壁)作为免疫刺激剂对照组,以投喂未添加茯苓多糖和免疫多糖(酵母细胞壁)饲料的作为空白对照组。连续投喂28 d后,取中华鳖的血液,测定了中华鳖血液中白细胞的吞噬活性、血清溶菌活力和补体活性。研究结果表明,在中华鳖饲料中添加茯苓多糖和免疫多糖(酵母细胞壁)能显著提高中华鳖白细胞的吞噬活性(t测验,P<0.05),而2个试验组之间中华鳖血液中自细胞的吞噬活性没有显著差异(t测验,P>0.05),2个试验组中华鳖血清中补体C3和C4的活性与对照组之间出现显著差异(t测验,P<0.05),而试验组之间无显著性差异(t测验,P>0.05)。研究结果证明在中华鳖饵料中添加茯苓多糖和免疫多糖(酵母细胞壁)对中华鳖的非特异性免