猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）的病原,可引起新生仔猪急性腹泻、呕吐、脱水且死亡率高。PED自1970年被报道以来广泛传播,特别是2010年底在中国的集中爆发给养猪业造成显著经济损失。PEDV基因组包含7个开放阅读框,编码四个结构蛋白和三个非结构蛋白PP1a、PP1ab、ORF3,PP1a和PP1ab经3个蛋白酶加工成16个成熟的非结构蛋白（Non-Structural Protein,Nsp）,即Nsp1-Nsp16。Nsp12是一种RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,Rd Rp）,在病毒复制转录过程中发挥重要作用。然而易感细胞中与其互作蛋白究竟是什么,该互作蛋白对病毒的复制有什么影响,尚未见报道。本研究旨在利用酵母双杂交文库筛选的方法对猪PEDV Nsp12在易感细胞LLC-PK1中的互作蛋白进行筛选,并利用CO-IP和蛋白免疫荧光细胞共定位的方法进行鉴定。同时对Nsp12进行分段表达,通过CO-IP方法对互作结构域进行确认。通过过表达和敲低互作蛋白的表达,验证该蛋白对病毒复制的影响。本实验利用酵母双杂交技术,筛选到了7个呈现蓝斑的菌落。回复杂交结果证实,其中有1个菌落表达的基因分别能够与Nsp12共同激活His3/Ade2/AUR1-C/MEL1报告基因的表达,即:乳酸脱氢酶B（LDHB）。由于该蛋白与Nsp8也存在互作,我们还在酵母系统内验证了Nsp12和Nsp8的互作关系。我们构建了Nsp12、Nsp8和LDHB的真核表达质粒,CO-IP和免疫荧光细胞共定位结果显示,Nsp12与Nsp8、LDHB存在免疫共沉淀现象,且三者均在Vero细胞的细胞质和细胞核内存在共定位现象。分段表达Nsp12蛋白与Nsp8、LDHB的免疫共沉淀实验表明Nsp12 C端Rd Rp结构域与Nsp8、LDHB具有互作关系。为了探究LDHB蛋白是否会影响PEDV感染,将PEDV SHpd/2012株感染Vero细胞,检测感染后不同时间内源性LDHB表达情况,同时在Vero细胞中过表达LDHB蛋白以及小RNA干扰敲低Vero细胞中LDHB的表达后接种PEDV SHpd/2012,检测病毒蛋白、转录和病毒滴度水平。结果表明PEDV感染后24 h内细胞内源性LDHB表达上调,过表达LDHB促进PEDV感染Vero细胞而LDHB表达下调会抑制PEDV感染。本研究结果提示细胞内源性LDHB可能和PEDV的Nsp12蛋白互作,病毒感染后内源性LDHB的上调,可能是PEDV病毒利用LDHB蛋白参与的自噬通路促进自身复制。Nsp12蛋白作为PEDV复制相关蛋白之一,具有Rd Rp活性,参与病毒复制复合体的形成。筛选宿主细胞中与PEDV Nsp12蛋白的互作蛋白有利于进一步了解PEDV感染复制途径,为研究PEDV感染机制提供理论支持。