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研究目的探索以siRNA敲减宫颈癌Hela和子宫内膜癌HEC-1-A细胞亚铁螯合酶表达，应用RT-qPCR、Western-blotting检测FECH-siRNA的敲减效率，以荧光显微镜及流式细胞仪对DFO联合siRNA增加宫颈癌Hela细胞、子宫内膜癌HEC-1-A细胞内PpIX积聚发出的特异性荧光进行定性与定量检测，从而摸索出ALA最低诱导剂量，减少肿瘤荧光诊断中ALA给药剂量，为应用于阴道镜辅助下的早期宫颈癌荧光诊断和宫腔镜辅助下的早期子宫内膜癌的荧光诊断奠定基础。研究方法1.培养宫颈癌Hela细胞及子宫内膜癌HEC-1-A细胞，用脂质体转染剂LipofectamineTM2000包裹FECH-siRNA，干扰细胞内亚铁螯合酶合成。2.用RT-qPCR和Western-blotting检测FECH-siRNA对Hela细胞FECH-mRNA的敲减效率。3.将宫颈癌细胞Hela及子宫内膜癌细胞HEC-1-A细胞分别分5组：①control；②0.1mM ALA；&0.5mM ALA③0.1mMALA+15mMDFO；&0.5mMALA+15mMDFO④0.1mMALA+FECH-siRNA；&0.5mM ALA+FECH-siRNA⑤0.1mMALA+15mMDFO+FECH-siRNA；&0.5mMALA+15mMDFO+FECH-siRNA应用荧光显微镜观察各组荧光强度，并且应用流式细胞仪进行定量检测，结果进行统计学分析。结果1.RT-qPCR检测用FECH-siRNA干扰Hela细胞后FECH-mRNA表达水平低于未干扰组，FECH-siRNA干扰组FECH-mRNA表达量是未处理Hela细胞的（0.54±0.050），两组经两个独立样本t检验显示差异具有统计学意义（t=5.72，P=0.00）。2.Western-blotting检测用FECH-siRNA干扰Hela细胞后亚铁螯合酶表达量明显低于未处理Hela细胞，结果显示FECH-siRNA敲减率为58.13%。3.荧光显微镜下观察Hela细胞，单纯使用ALA诱导0.5mM可见红色荧光；0.1mMALA联合15mMDFO或FECH-siRNA诱导可见微弱红色荧光；15mMDFO联合FECH-siRNA，ALA诱导浓度为0.1mM即可见较明显红色荧光。4.流式细胞仪定量检测各组Hela细胞荧光强度随ALA诱导浓度增加而增强。单纯0.1mMALA诱导与15mMDFO联合0.1mM诱导相比荧光强度差异性无统计学意义（t=1.38，P=0.24）。0.1mMALA诱导，15mMDFO与15mMDFO联合FECH-siRNA、FECH-siRNA干扰与15mMDFO联合FECH-siRNA诱导相比荧光强度差异均有统计学意义（t=139.12，P=0.00；t=70.16，P=0.00）。5.HEC-1-A细胞，单纯使用ALA诱导0.5mM可见红色荧光；0.1mMALA联合15mMDFO或FECH-siRNA诱导可见红色荧光；15mMDFO联合FECH-siRNA，ALA诱导浓度为0.1mM可见较强的红色荧光。6.流式细胞仪定量检测各组HEC-1-A细胞荧光强度随ALA诱导浓度增加而增强。相同ALA诱导浓度，单纯ALA诱导与ALA联合15mMDFO、ALA联合FECH-siRNA诱导相比荧光强度差异均有统计学意义（均P=0.00）。15mMDFO联合FECH-siRNA辅以ALA与ALA联合15mMDFO、ALA联合FECH-siRNA相比荧光强度差异均有统计学意义（均P=0.00）。结论1.所选用的靶向FECH的siRNA可成功降低Hela细胞内FECH的表达。2.DFO联合siRNA可增加Hela细胞内PpIX的荧光强度。单纯添加DFO和单独使用FECH-siRNA也可增加PpIX的荧光强度，但弱于两者联合使用。15mMDFO联合FECH-siRNA，ALA最佳诱导浓度为0.1mM。3.DFO联合siRNA可增加HEC-1-A细胞内PpIX的荧光强度。单纯添加DFO和单纯使用siRNA也可增加PpIX的荧光强度，但弱于两者联合使用。15mMDFO联合FECH-siRNA，ALA最佳诱导浓度为0.1mM。