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目的:口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,发病率高,严重威胁人类健康。目前有关OSCC的发病机制尚不清楚;有研究表明分化抑制因子-1(Id1)和核转录因子kappa B(NF-κB)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中均高表达,本研究为探讨Id1和NF-κB亚单位P65在OSCC发病机制中是否起着协同作用。方法:1.收集新鲜的OSCC临床标本和对应的癌旁组织标本。2.常规方法分离和提取鳞癌细胞,原代细胞培养、传代。3.RT-PCR与Western blot检测OSCC细胞中CD133与BMI-1的m RNA及其蛋白的表达情况。4.用FACS流式细胞仪和MACS细胞仪来分选出CD133+BMI-1+细胞并进行培养。5.构建Id1和P65基因的载体。6.用高效电转染办法分别将Id1和P65载体(单独或同时)转染CA9-22与HOK16B细胞株细胞,并检测其转染后细胞中CD133、BMI-1的表达变化。7.分别将CD133+BMI-1+细胞的CA9-22、HOK16B及OSCC细胞按不同的细胞数分别接种到SCID小鼠,观察异种移植瘤的生长情况。结果:1.在OSCC原代培养的细胞中表达CD133和BMI-1 m RNA及其蛋白,并可见到OSCC单个细胞同时表达CD133和BMI-1;2.成功分选出CD133和BMI-1双阳性的原代OSCC细胞;3.成功构建了Id1和P65基因载体;4.在培养的CA9-22细胞中,单独转染Id1或p65后,无法检测到BMI-1蛋白的表达;如同时转染Id1和p65后,可检测到细胞中CD133、Bmi-1、Cdc2与CD1.的表达明显上调,而这种协同性上调表达可被CD1抑制剂arginine vasopressin、Cdc2抑制剂catharidic aci以及蛋白抑制剂Cycloheximide所阻断;在空载体转染的细胞中无法检测到Bmi-1,、Cdc2与CD1的表达;但当转染Id1,p65,或Id1+p65后,细胞均明显表达CD1335.CA9-22细胞转染Id1和p65后,明显影响细胞周期的进程,促进细胞增殖;6.在分别接种10,000个和100,000个CD133和BMI-1双阳性细胞(来自CA9-22、HOK16B及OSCC提取的细胞)的SCID裸鼠组中,CD133和BMI-1双阳性癌细胞能引发异种移植瘤的生长。结论:1.OSCC新鲜标本中含有CD133和BMI-1双阳性细胞亚群。2.Id1和NF-κB亚单位p65可能通过Cyclin D1和Cdc2信号通路,上调CA9-22细胞中的CD133与BMI-1表达,促进了细胞的增殖。3.CD133和BMI-1双阳性细胞可以启动异种移植瘤的生长。4.Id1和NF-κB亚单位p65在OSCC发病中可能起着一定的协同作用。