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目的:通过体外培养获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs),采用microRNA-146a(miR-146a)的模拟物转染,并用牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对其进行刺激,观察炎性状态下miRNA-146a对人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs)成骨分化的影响,并探索其作用机制,从而为牙周炎的治疗、牙槽骨的再生提供更广阔的思路。方法:1.在天津医科大学口腔医院颌面外科选择拔除的健康的双尖牙的患者(年龄12-18岁),经患者知情同意后,收集拔除的双尖牙,PBS反复冲洗,刮取根中1/3牙周膜组织剪碎成1mm3小组织块,采用I型胶原酶+组织块法进行HPDLCs的原代培养,倒置相差显微镜下观察其形态及生长状况。2.检测P.g LPS对HPDLCs成骨分化能力的影响。设对照组、成骨诱导组和1μg/ml P.g LPS+成骨诱导组,7天碱性磷酸酶染色,14天后茜素红染色及茜素红半定量检测;3天、7天和14天后用Real-time PCR检测成骨相关基因的表达。3.检测miRNA-146a对HPDLCs成骨分化能力的影响。设miRNA-146a mimics转染组、negative control组和对照组,用成骨诱导液进行培养,7天行碱性磷酸酶染色和Real-time PCR检测成骨相关基因的表达,14天茜素红染色。4.检测miRNA-146a与P.g LPS共同作用对HPDLCs成骨分化能力的影响。设miRNA-146a mimics+1μg/ml LPS组、negative control+1μg/ml LPS组、1μg/ml LPS组,用成骨诱导液进行培养,7天行碱性磷酸酶染和Real-time PCR检测成骨相关基因的表达,14天茜素红染色。结果:1.倒置显微镜下观察细胞培养至第8-12天,少数长梭形细胞从组织块边缘爬出,并围绕组织块呈放射状排列,传代后细胞生长迅速。2.HPDLCs具有成骨分化的能力。3.P.g LPS刺激下HPDLCs成骨相关基因I型胶原蛋白(collagen 1,COL1)、Runt相关转录因子(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phophatase,ALP)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA表达显著降低且具有统计学差异(P<0.05),碱性磷酸酶染色及茜素红染色较正常成骨诱导组明显减弱。4.miRNA-146a转染后,碱性磷酸酶及茜素红染色较正常成骨诱导组明显增强,HPDLCs成骨相关基因COL1、RUNX2、、ALP和OCN mRNA的表达显著升高(P<0.05)。5.miRNA-146a和P.g LPS共同作用后,碱性磷酸酶染色及茜素红染色较单纯P.g LPS刺激组明显增强,且HPDLCs成骨相关基因COL1、RUNX2、、ALP和OCN mRNA的表达较单纯P.g LPS刺激显著升高,且具有统计学差异(P<0.05)。结论:1.P.g LPS抑制HPDLCs成骨分化的能力。2.2.miRNA-146a转染后HPDLCs成骨相关基因的表达显著升高,促进HPDLCs的成骨分化能力。3.miRNA-146a负调节P.g LPS对HPDLCs成骨分化的抑制作用,从而在一定程度上证实在炎症状态下,miRNA-146a的过表达可以有利于牙周组织的修复。