论文部分内容阅读
目的 本课题从肾病及肝入手，以肝开窍于目为切入点，以“惊恐、房劳”复制的小鼠肾精亏虚模型为平台，藉此研究肾精亏虚时肝之阴血的变化，进而明确肾精亏虚引起肝之阴血亏虚的可能机制。 方法 将30只雄性昆明小鼠用计算机取随机数法随机分为正常对照组、模型组和补肝组三组。其中模型组和补肝组采用惊恐加房劳复合伤肾法制造肾精亏虚模型。每天每只雄鼠按照1：2的比例与动情期雌鼠合笼，每天下午8：00投入动情期雌鼠，至次日上午8：00取出，下午8：00再投入另一批动情期雌鼠，至次日上午8：00取出，如此反复，让其房劳伤肾；每日上午8：00～下午8：00，将雄鼠放入特制的小铁丝笼内，再将此小笼固定在装有一只大家猫的大笼中，让猫与小鼠仅一网之隔，使猫爪能碰到但无法抓到小鼠，并每天上午10：00、下午3：00各另取两只活的小鼠喂猫示众，使其惊恐伤肾，连续21天，制造肾精亏虚模型。补肝组每天给予0.3ml／10g体重的一贯煎浓缩液灌胃，正常组及模型组予等量生理盐水灌胃，连续给药21天。①观察小鼠视网膜组织显微结构及超微结构改变；②采用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测小鼠视网膜细胞凋亡；③TUNEL法检测小鼠视网膜细胞凋亡；④检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax在小鼠视网膜细胞中的表达；⑤检测脑源性神经营养因子BDNF mRNA在小鼠视网膜细胞中的表达。 结果 实验结果显示，模型组小鼠视网膜在光镜下可见严重水肿、增厚，视网膜各层细胞明显疏松、水肿，排列紊乱；电镜下可见视杆、视锥细胞外节膜盘结构变形、扭曲、肿胀，呈不规则扩散。这些病理改变在补肝组都明显减轻，甚至无异常改变。模型组小鼠视网膜细胞DNA呈现细胞凋亡梯状电泳特征性条带，正常组和补肝组小鼠视网膜均无类似表现。TUNEL法标记显示，模型组小鼠视网膜的细胞凋亡主要发生在神经节细胞层(GCL)和内核层(INL)；各组小鼠视网膜细胞TUNEL法标记的阳性细胞率比较显示，模型组与正常组相比有非常显著的差异(p＜0.01，)，补肝组与正常组及模型组相比均有非常显著的差异(p＜0.01)。凋亡相关基因Bc1-2和Bax在模型组小鼠视网膜神经节细胞层(GCL)和内核层(INL)表达增强；各组小鼠视网膜细胞Bc1-2和Bax表达的阳性率比较显示，模型组与正常组及补肝组相比均有非常显著的差异(p＜0.01)。正常组和补肝组小鼠视网膜细胞脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA的表达较模型组增强。 结论 肾精亏虚模型小鼠视网膜细胞凋亡率显著增高，显微、超微结构发生异常，说明肾精亏虚可以引起肝之阴血亏虚，对肝主目功能产生影响。补肝药可以有效阻止这一病理改变，从而反证了肝之阴血亏虚是肾精亏虚引起视网膜病理改变的重要环节。其机制可能是通过影响凋亡调控基因Bc1-2／Bax的比率，抑制BDNF等视网膜细胞保护因子的表达等途径产生的。