神经浸润转移是胆管癌的重要特点之一，也是导致胆管癌病人术后复发率高和预后差的重要原因。而发生神经及神经周围浸润的机制至今尚不明朗，过去认为主要是神经周围间隙中张力较低，易于肿瘤生长；近年来研究表明，某些表面特性分子和神经组织周围微环境成分在肿瘤的嗜神经性上可能起重要作用。因此，对胆管癌浸润神经的原因和机制进行深入研究，对于临床胆管癌病人预后的判定，以及有针对性治疗措施的选择，具有重要意义。NGF—神经生长因子是神经营养因子家族的一员，它存在于中枢和外周多种组织内，与神经末梢相应受体(p75NTR和TrkA)结合，发挥促神经生长和保护等作用。NGF的靶细胞质膜与核膜上均有p75NTR(低亲和力受体)和TrkA(高亲和力受体)两类受体。NGF必须与高亲和力受体TrkA结合才能发挥作用，通过一系列细胞内的信号传导途径影响靶细胞的生长，凋亡,分化和侵袭潜能。研究发现，神经营养因子家族成员不仅仅是神经生长发育、修复所必需的，它们还参与了某些肿瘤神经侵袭过程，这一作用与其相应受体在肿瘤细胞的表达情况密切相关。如NGF及其受体在前列腺癌组织中的表达与前列腺癌沿神经生长侵袭的特性有关。而另一类神经营养因子GDNF可以促进表达GDNFR的胰腺癌细胞在体外沿其浓度梯度迁移等。在此基础上，本课题选择神经生长因子——这一最早发现、研究最为广泛的一类神经营养因子——作为切入点，探讨胆管癌发生神经侵袭转移的原因和机制。本实验首先采用免疫组化的方法对临床胆管癌手术切除标本的NGF及其受体的表达进行了检测，并分析了NGF及其受体的表达与胆管癌临床病理学特征之间的关系。结果显示：38例胆管癌标本中有23例NGF表达阳性，阳性率为61%；19例p75NTR表达阳性，阳性率为50%；27例TrkA表达阳性，阳性率为71%。神经周围浸润阳性21例，其中，NGF表达阳性16例，阳性率76.2%；p75NTR表达阳性12例，阳性率57.1%；TrkA表达阳性18例，阳性率为85.7%。统计学检验发现：1、神经周围浸润与NGF及其高亲和力受体TrkA的表达相关(p<0.05)。NGF及TrkA表达阳性组PNI(神经周围浸润指数)均明显高于阴性组(p<0.01)，而p75NTR表达阳性组与阴性组之间PNI无显著差异(p>0.05)；2、胆管癌的分化程度与p75NTR表达相关(p<0.05)，高、中分化胆管癌细胞p75NTR表达阳性率(18/29)高于低分化癌(0/6)；3、NGF、p75NTR、TrkA与患者年龄、性别、肿瘤部位均无关。<WP=8>在此基础上，进一步检测QBC939胆管癌细胞株NGF及其受体的表达情况，发现NGF及两种NGF受体在胆管癌细胞株QBC939中存在明显表达随后本研究从运动性、粘附力和降解ECM三方面入手，探讨NGF通过其受体在胆管癌神经侵袭中所发挥的作用和机制。经体外研究发现，NGF在多环节介导了胆管癌的神经浸润转移，而这一作用与其高亲和力受体TrkA在胆管癌细胞的表达有关。1、利用侵袭小室观察了NGF对胆管癌细胞体外迁移能力的影响，发现NGF对胆管癌细胞兼有化学趋化和化学促进作用；其中介导胆管癌细胞在体外沿着NGF的浓度梯度定向迁移的化学趋化作用是其主要效应。这一作用具有明显的量效依赖关系，可能是造成癌细胞神经侵袭的原因之一。2、RT-PCR和Western-blotting方法检测了NGF对胆管癌细胞分泌的Ⅳ型胶原酶在转录和翻译水平的影响。发现NGF明显上调Ⅳ型胶原酶的表达，可能是NGF促进胆管癌侵袭转移的重要机制。3、检测了NGF处理后NCAM蛋白的表达和STXmRNA的表达。发现生理浓度的NGF能够促进NCAM的表达，有利于癌细胞对神经的特异性识别和定向粘附作用；同时促进STXmRNA的表达，从而上调PSA，降低肿瘤细胞间通过NCAM的粘附作用，促进转移。以上结果初步说明了NGF和TrkA的表达同胆管癌神经侵袭之间的密切关系，发现NGF在多个环节增强了胆管癌细胞的体外侵袭能力。据此推测神经组织周围的高NGF浓度可能是诱导表达受体TrkA的胆管癌细胞侵袭神经的重要原因之一。胆管癌细胞自身分泌的NGF在胆管癌的神经侵袭中也可能起一定的作用。此外，神经营养因子家族还有众多的成员，如BDNF、NT-3、GDNF等，它们是否也在胆管癌的神经浸润转移中起作用亦或是起何种作用还有待于进一步研究探讨。