我国在上世纪七十年代，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所沈荣显教授领导的科研小组，通过体外传代的方法，研制成功了世界上第一个也是唯一的慢病毒疫苗——马传染性贫血病毒（EIAV）驴白细胞弱毒疫苗（DLV）和驴胎皮肤细胞弱毒疫苗（FDDV），并申请了专利保护。该疫苗对同源和异源强毒均有较好的免疫力，成功控制了该病在我国的流行。DLV临床使用将近30年，安全性得到了充分的验证，为研究其他逆转录病毒疫苗提供了良好的自然动物模型体系。EIAV弱毒疫苗研制成功对HIV疫苗的研制有重要的指导意义，因此阐明中国EIAV强毒株和疫苗株的毒力特征、免疫保护机制和基因变异特点也显得尤为重要。 为了从分子水平阐明中国EIAV弱毒疫苗的致弱机制和免疫保护机制，本实验室前期工作首先对EIAV疫苗研制过程中的四个经典毒株进行序列分析，即强毒株LN、D510和疫苗株DLV、FDDV。根据存在于强毒株和疫苗株之间的一致性稳定突变位点，在FDDV的低拷贝全长感染性分子克隆pLGFD3的基础上先后构建了env基因内4个点和6个点回复突变为强毒特征的感染性分子克隆mFD5-4-7和mFD7-2-11，并获得了相应的衍生病毒。本研究涉及的毒种包括上述强毒LN，疫苗毒DLV，疫苗毒pLGFD3和env逆向回复突变毒mFD5-4-7和mFD7－2－11，对其在体内的病毒学、免疫学和序列变化进行综合分析，以阐明强毒与疫苗毒之间的本质差异，并着重探讨env区涉及的一致性突变位点对毒力及免疫的影响。 本研究首先建立了实时定量RT－PCR检测血浆EIAV RNA病毒载量的方法并进行了方法学评价，以对EIAV在动物体内的复制情况进行直观的量化分析。对EIAV强毒株LN，驴白细胞弱毒疫苗株DLV，驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株pLGFD3，和env逆向回复突变株mFD5－4－7和mFD7－2－11接种动物定期或发热期采集的血浆样品进行检测，结合动物的临床体温和血小板检测结果，对EIAV各毒株在动物体内的复制特点及毒力特征进行分析和评价。为了评价EIAV弱毒疫苗的免疫保护机制，本研究对DLV、pLGFD3、mFD5－4－7和mFD7－2－11接种动物进行了体液免疫（包括结合抗体p26和中和抗体）和细胞免疫（包括淋巴细胞增殖功能和细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能）的动态跟踪检测。EIAV基因组在体内有较高的变异率，从而可能影响到病毒的毒力和免疫，本研究对强毒LN接种马在各个发热点的血浆RNA进行巢式RT－PCR扩增env gp90片段，扩增产物克隆后进行测序分析。对pLGFD3、mFD5－4－7和mFD7－2－11接种动物，主要针对体外操作发生点突变的区域进行测序分析。本研究结果中有关中国EIAV强弱毒株的毒力特点、免疫特点和序列特征信息有助于我们进一步了解我国EIAV弱毒疫苗的致弱机制和免疫保护机制，为包括HIV在内的其他慢病毒疫苗的研制提供思路。