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本论文分为四章。第一章对苦玄参的研究进展进行了总结并陈述了选题的依据。第二章以大孔吸附树脂将苦玄参提取物分成不同部位,然后通过药理实验筛选出活性部位。第三章对苦玄参中的化学成分进行了分离和鉴定。第四章对苦玄参三萜的分析方法以及提取和精制工艺进行了初步研究。 一、苦玄参研究进展和选题依据 苦玄参是一味具有浓厚广西地方特色的药材:广西是其主产区,首先由广西植物学者从民间发掘,并开展种植研究,现已在广西多个地区有大面积种植,药材资源丰富;首先由广西医药工作者开展植化、药理和临床研究,目前已研制成功数个以苦玄参为主要成分的中成药,临床效果反映良好。 但是,对于苦玄参的植化研究,目前只有三萜类和黄酮类化学成分的报道,且活性成分还不明确;市场上的中成药服用量偏大,质量控制标准也有待提高;药理预实验发现,苦玄参水提物的乙酸乙酯萃取部分具有显著的抗菌和解热作用,提示苦玄参提取物经精制后疗效可能会更好;中药在治疗急支和上呼吸道感染方面有自身的特色和较稳定市场份额。因此,通过药理实验找出活性部位,并对其开展植化、分析方法和工艺研究,对苦玄参应用于新药开发将发挥积极作用。 二、活性部位筛选 利用大孔吸附树脂将苦玄参提取物划分成多个部位(群),通过体内和体外药理实验找出了两个得率较高且具有显著抗菌和抗炎活性的部位。另外,三萜部位还表现出一定的促进免疫应答的活性,在其 0.25 mg·ml-1浓度时,对 BEL-7402 肝癌细胞株、A-549 肺癌细胞株、P-388 白血病细胞株、HL-60 白血病细胞株的抑制率分别为 74.3%、94.3%、67.8%和 55.8%。 三、化学成分研究 通过多种分离技术和波谱方法,从购自广西梧州市的苦玄参中一共分离鉴定了 30 个化合物,涉及 7 大类化学成分,包括酰胺 1 个,即 asperglaucide (化合物 1);蒽醌 2 个,即 1-羟基-7-羟甲基-9,10-蒽醌 (化合物 2) 和 1,2,5-三羟基-9,10-蒽醌 (化合物 3);黄酮 1 个,即 5,7,4’-三羟基黄酮 (化合物 4);脂肪酸 1 个,即 9,16-二羰基-10,12,14-三烯-十八碳酸 (化合物 5);甾体 2 个,即β-谷甾醇 (化合物 6) 和胡萝卜苷 (化合物 7);苦玄参酮 2个,即苦玄参酮 I (化合物 8) 和苦玄参酮 II (化合物 9);苦玄参苷元 3 个,即苦玄参苷元 I (化合物 10)、苦玄参苷元 VI (化合物 11)、苦玄参苷元 VII (化合物 12);苦玄参苷 8 个,即苦玄参苷 IA(化合物 13)、苦玄参苷 IB (化合物 14)、苦玄参苷 II (化合物 15)、苦玄参苷 IV (化合物 16)、苦玄参苷 VI (化合物 17) 和 VII (化合物 18)、苦玄参苷 X(化合物 19)、苦玄参苷 XI (化合物 20);葫芦苦素 2 个,即二氢己降葫芦苦素 (化合物 21) 和脱氢拜俄尼苷 (化合物 22)。苯乙醇苷类化合物 8 个,即阿克苷 (化合物 23)、异阿克苷 (化合物 24)、反式阿克苷 (化合物 25)、反式异阿克苷 (化合物 26)、picfeosides A～D (化合物 27～30)。其中有 21 个化合物<WP=6>iv 苦玄参的化学成分研究及应用为首次从苦玄参中分离得到,新化合物 10 个(根据 SCIFinder 和 Belstein 检索结果)。 另外,根据《中药新药质量标准用对照品研究的技术要求》,制备了 14 g 可用于含量测定的苦玄参苷 IA 化学对照品。 四、分析方法和工艺研究 建立了苦玄参苷 ?A 和苦玄参苷 ?B 的 TLCS 分析方法,并将其用于不同产地苦玄参的根、茎、叶中苦玄参苷 IA 和 IB 的含量测定。以甲醇为溶媒,超声提取苦玄参各药用部位,提取物经大孔树脂 D101精制后,点于含 1% CMC-Na 的硅胶 GF254板上,以氯仿-甲醇-水(4:1:0.1)为展开剂展开后,用 CAMAG TLC III 型线性扫描仪测定,检测波长为 268 nm,狭缝尺寸为 8 mm×0.6 mm。苦玄参苷 IA 在 1.1～5.4 μg、苦玄参苷 IB 在1.0～6.2 μg 范围内与各自峰面积呈良好的线性关系,r 分别为 0.9990 和 0.9992,加样回收率分别为 98.3%和 97.5%;在同一产地不同药用部位中,苦玄参苷 IA 和 IB 的含量:叶>茎>根;在同一药用部位中,叶中苦玄参苷含量:IA>IB,根和茎中苦玄参苷含量:IB>IA。实验还检出一种苦玄参伪品。从苦玄参苷 IA 和 IB 的含量来看,可结合必要的药理实验,考虑只以苦玄参的地上部分入药。 建立了苦玄参总三萜的分光光度分析方法。苦玄参总三萜的最大吸收波长为 261 nm,与对照品苦玄参苷 IA 一致。苦玄参苷 IA 在 4.56～91.2 μg·ml-1浓度范围内与其吸收度呈良好的线性关系,回归方程为 Y=0.0131X+0.0151,r=0.9995(n=7)。用于实际样品测定,平均回收率为 96.3%。 初步研究了苦玄参三萜的提取和精制工艺。乙醇对苦玄参三萜的提取效果明显优于水煎。以 TLC 为检测手段,考察大孔树脂对苦玄参总三萜的吸附和洗脱条件,并用分光光度法测定提取物中的苦玄参总三萜含量。大孔吸附树脂可以将苦玄参总三萜含量由浸膏中的8.6%提高至 27.3%。如果增加 20%乙醇洗脱操作以除去部分非三萜成分,总三萜含量可进一步提高至 52.1%。提示大孔树脂能有效富集并纯化苦玄参总三萜。