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目的:慢性乙型肝炎是指乙肝病毒导致的肝脏损害,血中HBsAg阳性大于等于6个月临床表现有厌油腻、四肢无力、恶心、腹部胀痛、肝区痛等症状者。由于慢性乙型肝炎的致病性强,早期发现慢性乙型肝炎感染是治疗疾病和预防疾病的关键。临床诊断包括实验室检查:丙氨酸氨基转移酶(Cerealthirdtransaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate transaminase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、胆碱酯酶、乙肝病毒标志物、HBV-DNA定量等以及影像学检查)。目前的西医治疗效果并不理想,中医的辩证施治理论得到了较好的成果,按照2012年《慢性乙型肝炎中医诊断专家共识》,将慢性乙型肝炎患者大致分为湿热蕴结、肝郁脾虚及瘀血阻络三种主要证型。然而这些证型是由中医师根据自己的经验进行诊断的,分子生物标志物尚不清楚,明确的诊断需要更多的生物标志物联合应用。代谢组学是一项新兴技术,功能强大,已经广泛应用于疾病的诊断,治疗和预防。肝脏参与多种代谢过程,当肝脏发生疾病时,体内的代谢物也会发生明显改变。本研究的目的是运用基于液相色谱-质谱(Liquid Chromatography-Spectroscopy,LC-MS)的代谢组学方法对于临床20例湿热蕴结型、24例肝郁脾虚型、20例瘀血阻络型慢性乙型肝炎患者血清代谢物谱进行对比分析,从分子生物学方面研究3组患者血清代谢物差异,筛选出可以用于慢性乙型肝炎中医辩证分型的代谢物,协助低年资的中医师对于症状不典型疾病的诊断,可以减轻患者的经济负担。方法:1.研究对象及实验分组:本实验收集64名大连第六人民医院实验室证实为慢性乙型肝炎的患者血液样本,每一例病患中医证型需3名高年资、主治中医师资格以上医师同时确认方可确认入组。中医辩证分型的三组患者分别为湿热蕴结型20例、肝郁脾虚型24例、瘀血阻络型20例慢性乙型肝炎患者。收取上述患者的血浆标本。本实验中所有患者近半年内均未经过中药及干扰素或核苷类似物抗病毒治疗者,同时无其他系统合并症。2.样本处理及数据分析:采集的样本通过预处理,提取代谢物,进行液相色谱-质谱联用分析。简言之,经过液相色谱将代谢物分离后,进行质谱分析。3.生物标志物的筛选和鉴定:将实验所获得数据进行提取、预处理等操作后,通过谱库检索对代谢物进行定性和定量的分析。然后采用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)、偏最小二乘判别分析(Partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)进行统计学分析,筛选差异性代谢物。结果:1.本研究采用液相色谱质谱联用的方法分析了湿热蕴结型、肝郁脾虚型、瘀血阻络型慢性乙型肝炎患者血浆代谢轮廓。采用多元统计分析方法筛选出鉴别慢性乙型肝炎三组中医辩证分型之间的相关差异性代谢物。2.本实验研究初步筛查共检测184个代谢物及88个临床指标,经过统计学分析,最终发现ALT、总胆红素、SM(33:1)在湿热蕴结型、肝郁脾虚型慢性乙型肝炎存在明显差异。其中ALT在湿热蕴结型慢性乙型肝炎中含量显著增高,且明显高于其他两组。总胆红素、SM(33:1)在肝郁脾虚型慢性乙型肝炎组含量较低。结论:综上所述,本文利用基于LC-MS的代谢组学的研究策略筛选具有临床意义的潜在血清代谢标志物的研究可以为慢性乙型肝炎的中医分型的鉴别提供思路。