利用糖芯片技术快速检测沙门氏菌

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近几十年来,沙门氏菌(Salmonella)作为人畜共患病的主要食源性病原体,所引起的疾病遍布世界各处,严重危害社会健康以及经济发展。创建一种快速准确的检测手段一直是沙门氏菌检验的核心问题。现虽有多种检测手段,但各有缺陷,迫切需要开发一种快速、灵敏度高、特异性强、重现性好的沙门氏菌检测技术。大量研究显示,糖类物质在生命体中至关重要。探究糖-生物大分子之间的相互作用,有利于了解生命过程,对药物开发、疾病治疗、细菌检测等方面至关重要。但由于糖分子功能和结构的复杂性,使得糖类物质的研究困难重重。现今出现的糖芯片(Carbohydrate Microarray)技术是一种重要的生物检测技术,其优势有用量少、通量高和特异性强等,可广泛用于糖-生物大分子之间相互作用的研究。目前,在国内外糖芯片仍处于探索阶段,在细菌检测方面的研究较少;而在我国对糖芯片技术的研究远不如国外。因此,建立一个糖芯片技术用于沙门氏菌的检测非常具有意义。本课题利用FimH蛋白质与甘露糖之间的相互作用,通过化学修饰与共价固定的方式来构建糖芯片用于沙门氏菌检测。在构建糖芯片过程中,选择环氧化和氨基化的玻片,优化了构建流程,确定最优构建条件。后将糖芯片用于沙门氏菌检测,以沙门氏菌ATCC31685和ATCC9184为主要研究对象,首先制作不同类型的糖芯片用于优化糖芯片检测条件;在优化条件的基础上,改变糖浓度或细菌浓度以用于确定糖芯片检测限值;继而系统地研究了糖芯片在沙门氏菌或凝集素FimH拮抗剂筛选上的应用,并探究糖芯片对菌株的破坏性。由实验现象可知,ATCC31685沙门氏菌可与D-甘露糖化合物修饰的糖芯片结合,其中,以Man-1与NHS玻片所构建的糖芯片效果最优,并且两株不同的沙门氏菌(ATCC31685和ATCC9184)与糖芯片的结合能力不同以及在血清混合物中也可检测沙门氏菌,因此糖芯片可作为沙门氏菌的一种快速检测手段;糖浓度为313μmol/L或细菌浓度106个/mL为目前可检测到荧光信号的最低应用浓度,并且糖芯片检测后对菌株无破坏性,可继续用于其他检测项目:同时,实验结果表明糖芯片可作为FimH蛋白拮抗剂的筛选工具。
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