HPLC是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。除研究HPLC固定相和流动相之外,发展新型的检测器也是推动HPLC技术发展的重要途径。RRS是近年来发展起来的一种新型的光谱分析技术,它具有高灵敏度(相对于荧光光谱法),通常比吸收光谱的检出限也低1-2个数量级。因此适于痕量和超痕量物质的分析检测,而且它还适用于一些弱结合力的反应体系。只要反应能引起分子体积、形貌、疏水性、分子构象变化或发生吸收-散射、荧光-散射间共振能量转移的反应体系,通常均能导致RRS的显著变化,因此非常适于生化和药物的研究和分析。然而RRS的选择性并不高,对于具有相似官能团的物质没有识别,因此我们可以利用HPLC的高选择性来填补RRS技术的空缺。目前只有少数分析化学工作者注意到此方法。本文建立了HPLC-RRS联用技术的思路并设计了柱后匀质化装置,将HPLC的高分离能力和RRS的高灵敏性结合,将RRS方法设计成一种在线技术。该方法在不同药物的检测上得到了验证,本文并对其动力学进行了研究,分别从量子化学和动力学方面对该方法进行了补充。该新技术的应用无疑对RRS分析的发展和HPLC分析检测器的开发均具有重要意义。本文由绪论、研究报告两个部分(五个章节)组成。其中研究报告由2、3、4三个章节组成。1.绪论绪论部分简述了HPLC的发展,RRS的简要概述,柱后匀质化装置的设计,HPLC和匀质化装置的“接口”问题,液相色谱-柱后衍生联用技术的发展和应用,HPLC-RRS联用技术的研究以及对未来的展望。2.新型的高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术的动力学研究建立了一种新颖的HPLC和RRS方法,并应用于人体尿液中FQs的检测。药物经HPLC色谱柱分离后与[Ce(OH)3]+探针离子形成离子缔合物,进而流入检测器,在λex=λem=365nm处被检测,得到了良好的结果。分别对被分析物的光谱特征、流速、有机流动相的比例、反应时间和缔合物的聚集程度进行了研究,为该联用技术未来的发展做了铺垫。同时,HPLC-RRS的建立也为光学性质和电化学性质弱的物质的检测打开了新的视野。3.液相色谱和共振瑞利散射技术的联用及在氨基糖苷类药物检测上的应用考虑到很多物质没有紫外吸收和荧光特性,我们利用柱后匀质化装置建立了一种新颖的HPLC-RRS的研究方法,并在AGs的检测中得到了验证。同时这一结果也用量子化学进行了精确的计算。然而起初灵敏度不是特别令人满意,我们考虑是流通池体积过小的原因,后来我们认为这是不科学的。因为即使流通池体积足够大,而通过的光强度不变,则RRS信号也不会增强。因此我们考虑换用稍长的反应盘管,或是增大反应池体积,以便获得更好的RRS信号。有趣的是,当我们检测人体血液和尿液中被分析物的含量时,它们都不会收到基质中杂质的干扰,该方法为将来生物基质中药物的检测开拓了一个新的前景。4.一种在线的色谱技术和共振瑞利散射联用方法的研究分析该方法建立了一种流动状态的共振光散射技术,并将其应用于液相色谱仪的检测部分。在弱酸环境中,CR和TOB通过静电引力,疏水作用力和电荷转移效应可以形成离子缔合物,从而在液相色谱检测器上被检测到。以往的共振光散射技术都是在静止状态下测定,本论文主要介绍了通过色谱技术和共振瑞利散射的联用在流动状态下测定没有光谱性质和电化学性质的物质,增加了该类物质的检测手段,这也为该类物质的检测提出了新的挑战。并且本论文用量子化学推测了离子缔合物的形成机制,用ESI-MS/MS也证实了该方法的可行性。同时,该联用技术同其他液相色谱蒸发光技术,液相色谱质谱联用,液相色谱化学发光检测技术等相比都省去了较多繁琐的步骤。