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目的:用β-淀粉样肽(Aβ)和冈田酸(OA)经大鼠侧脑室注射和处理体外培养的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),来研究 Aβ沉积和Tau蛋白过度磷酸化对 M1毒蕈碱样乙酰胆碱能受体(M1AChR)表达的影响,探讨阿尔茨海默氏病发病机制中学习记忆障碍的发生机制。 方法:选用 Aβ1-42、OA和Aβ1-42+OA侧脑室注射 SD大鼠大脑海马区组织,用 Morris水迷宫对大鼠进行定向航行及空间探索试验,采用蛋白印迹法(Western blotting)检测淀粉样肽前体蛋白(APP)、Tau蛋白磷酸化(ser-404位点)和M1AChR蛋白表达水平;分析实验大鼠行为学改变和M1AChR的相关关系。 用不同浓度的Aβ1-42和OA处理 SH-SY5Y细胞,培养24小时,MTT比色法检测细胞还原率,选择 Aβ1-42和OA处理细胞的最佳浓度。然后用1μmol/L的Aβ1-42、20nmol/L的OA以及1μmol/L Aβ1-42+20nmol/L OA分别处理 SH-SY5Y细胞,培养24小时;采用 Western blotting检测三种不同方式处理的SH-SY5Y细胞中 APP、Tau蛋白磷酸化和M1AChR蛋白的表达水平,用 Real-time PCR方法检测M1AChR的mRNA表达水平。 结果:Morris水迷宫各注射组的定向航行试验结果显示大鼠平均逃避潜伏期延长,空间探索试验结果显示大鼠第一次穿越平台时间延长及平台穿越次数减少。鼠脑海马区组织中,Aβ1-42注射组(1mg/L)的APP蛋白表达水平和Tau蛋白磷酸化水平升高,M1AChR的蛋白表达水平明显降低。OA注射组(0.4mmol/L)的Tau蛋白磷酸化水平显著升高,M1AChR的蛋白表达水平明显降低,APP蛋白表达水平无明显改变。Aβ1-42+OA注射组的APP蛋白表达水平和Tau蛋白磷酸化水平均升高,M1AChR的蛋白表达水平降低。Morris水迷宫实验中各试验结果与鼠脑海马区各注射组的M1AChR蛋白表达水平有明显相关性。 经1μmol/L浓度的Aβ1-42处理 SH-SY5Y细胞后,细胞中 APP蛋白表达水平和Tau蛋白磷酸化水平升高,M1AChR的蛋白表达水平和mRNA表达水平均降低。;经20 nmol/L浓度的OA处理 SH-SY5Y细胞后,细胞中 APP蛋白表达水平无明显改变,但 Tau蛋白磷酸化水平显著升高,M1AChR的蛋白表达水平和mRNA表达水平均明显降低。经 Aβ1-42和OA联合处理 SH-SY5Y细胞后,细胞中 APP蛋白表达水平和Tau蛋白磷酸化水平均升高,M1AChR的蛋白表达水平和mRNA表达水平均明显降低。 结论:Aβ1-42可以引起鼠脑海马区和SH-SY5Y细胞的APP蛋白高表达。Aβ1-42和OA可以导致鼠脑海马区和SH-SY5Y细胞的Tau蛋白过度磷酸化,Aβ1-42、OA及 Aβ1-42+OA联合处理的细胞中,M1AChR的蛋白表达水平和mRNA表达水平均降低,鼠脑海马区组织中,M1AChR的蛋白表达水平降低。与 Morris水迷宫实验结果相关分析显示,在阿尔茨海默病(AD)中,M1AChR可能与学习、记忆能力低下及认知功能障碍有关。