【摘 要】
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目的:利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表达穿梭载体,建立经骨保护素基因(Osteoprotegerin,OPG)修饰的Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)瞬时表达体系并检测
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目的:利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表达穿梭载体,建立经骨保护素基因(Osteoprotegerin,OPG)修饰的Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)瞬时表达体系并检测其表达能力,为基因工程与组织工程联合治疗牙周病提供细胞基础。方法:穿刺抽取成年Beagle犬骨髓约2-3ml,通过全骨髓贴壁法获取BMSCs。传代至第3代,脂质体瞬时转染经鉴定的重组质粒pSecTag2/B-OPG,并用RT-PCR、Western-blotting检测OPG的表达水平。结果:重组质粒pSecTag2/B-OPG经HindⅢ单酶切及EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,电泳显示切下的片段均与预期大小相符,经测序证实此基因与Genbank中[gi:33873056]提供的序列一致;RT-PCR结果显示:重组质粒pSecTag2/B-OPG在骨髓基质细胞中有转录;Western-blotting结果显示:在39天内,重组质粒pSecTag2/B-OPG在骨髓基质细胞中有持续表达。结论:成功建立了OPG基因修饰的骨髓基质细胞瞬时基因表达体系。
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