论文部分内容阅读
糖皮激素分泌过多和长期应用糖皮质激素会引起肥胖、代谢综合征的发生，肥胖的发生发展与糖皮质激素作用异常有关。11－羟化类固醇脱氢酶（11β－HSD1）作为糖皮质激素的局部放大器，可将组织中无活性的可的松转化为有活性的氢化可的松，脂肪组织11β－HSD1在肥胖发生发展中起关键作用，动物实验及临床研究都证实脂肪组织11β-HSD1是治疗肥胖、糖尿病等代谢综合征的新靶点。但是目前尚没有脂肪组织靶向的11β-HSD1抑制剂问世，我们在前期研究基础上创新性地合成特异的脂肪组织11β－HSD1靶向抑制剂，研究其对饮食诱导肥胖小鼠脂肪组织及全身代谢的影响，我们发现脂肪组织11β－HSD1靶向抑制剂不仅能改善脂肪组织局部分泌功还能够通过改善肝脏糖脂代谢的关键基因表达减轻肥胖小鼠体重、改善糖耐量。另一方面，糖皮质激素除影响代谢外，也是重要的免疫调节因子，事实上，糖皮质激素作为抗炎药物广泛应用于临床，抑制11β－HSD1活性，在改善代谢带来益处的同时，有可能促发内源性炎症反应，加重心脑血管并发症。但是目前抑制11β－HSD1活性对炎症的影响并不明确，因此我们在前期研究基础上在体内外进一步研究抑制抑制11β－HSD1肥胖小鼠对脂肪组织及全身炎症的影响，结果发现抑制11β－HSD1活性在改善肥胖小鼠全身代谢的同时不仅没有引起肥胖小鼠体内炎症因子表达升高，反而改善了肥胖小鼠脂肪组织炎症，11β－HSD1是治疗肥胖及其相关疾病的新的有效靶点。实验分两部分：第一部分：脂肪组织靶向11β－羟基类固醇脱氢酶1抑制剂治疗饮食诱导肥胖的机制研究第二部分：BVT.2733,特异性11β－羟基类固醇脱氢酶1抑制剂改善肥胖及其炎症的分子机制研究第一部分：脂肪组织靶向11β－羟基类固醇脱氢酶1抑制剂治疗饮食诱导肥胖机制研究目的：目前治疗肥胖及代谢综合征的药物有着各种限制和副作用。脂肪组织11β－羟基类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）已成为治疗肥胖、代谢综合征的新靶点。但是目前尚没有脂肪组织靶向的11β-HSD1抑制剂问世，我们旨在创新性合成仅作用于白色脂肪组织11β-HSD1的靶向抑制剂，研究肪组织11β-HSD1的靶向抑制剂能否减轻饮食诱导肥胖小鼠体重，改善糖耐量。方法：特异性11β-HSD1抑制剂BVT.2733和白色脂肪组织脉管结构靶向多肽CKGGRAKDC相连接，靶向药物CKGGRAKDC-BVT.2733(T-BVT)和相同剂量的非靶向药物NT-BVT（CKGGRAKDC和BVT.2733的混合物）分别通过皮下注射干预饮食诱导肥胖小鼠两周。结果：和对照组相比，靶向药物组（T-BVT）明显减轻肥胖小鼠体重，改善糖耐量；在脂肪组织，T-BVT组减少脂肪细胞体积，增加脂肪组织脂联素（adiponectin）、 vaspin mRNA的表达;在肝脏T-BVT减少了糖异生的限速酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK) mRNA的表达,增加了脂质氧化关键基因肉碱脂酰转移酶I (mCPT-I)、过氧化物酶体增生物激活受体α（PPARα）mRNA的表达；非靶向药物没能改变脂肪细胞体积及肝脏基因表达，但是却增加了肌肉组织解偶联蛋白2（UCP-2） mRNA的表达。结论：脂肪组织靶向的11β-HSD1抑制剂是治疗肥胖及代谢综合症的新的有效药物。第二部分：BVT.2733,特异性11β－羟基类固醇脱氢酶1抑制剂改善肥胖及其炎症的分子机制研究目的：抑制11β－羟基类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）已成为治疗肥胖、代谢综合征的新方法，但是作为抑制局部糖皮质激素的药物，目前抑制11β-HSD1后对肥胖炎症的影响还不明确，我们旨在研究特异性11β-HSD1抑制剂BVT.2733对肥胖小鼠脂肪组织炎症及巨噬细胞浸润的影响。方法：体内研究：高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠建立了饮食诱导肥胖动物模型，特异性11β-HSD1抑制剂BVT.2733通过灌胃的方法干预肥胖小鼠4周；体外：在前脂肪细胞3T3-L1和巨噬细胞J774A.1通过慢病毒转染技术干涉和高表达11β-HSD1基因，通过实时荧光定量PCR技术检测相关炎症基因的表达。结果：体内：BVT.2733干预4周不仅减轻了肥胖小鼠体重、改善了糖耐量及脂肪细胞分泌功能，而且减少了肥胖小鼠脂肪组织炎症基因单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA的表达及巨噬细胞浸润；体外：11β-HSD1抑制剂BVT.2733及干涉11β-HSD1基因减少了巨噬细胞及前脂肪细胞炎症基因MCP-1、白细胞介素-6（IL-6）的表达，高表达11β-HSD1基因放大了炎症基因MCP-1、IL-6的表达，而这种放大的炎症能够被BVT.2733所抑制。结论：BVT.2733不仅减轻了肥胖小鼠体重，改善了糖耐量及脂肪细胞分泌功能，而且减少了肥胖小鼠脂肪组织炎症基因MCP-1、TNF-α的表达及巨噬细胞浸润，11β-HSD1可能成为治疗肥胖及其相关心血管并发症的新的有效靶点。