初情期前和初情期山羊松果体全基因组DNA甲基化分析

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阐明哺乳动物初情期启动机制对动物生殖调控技术发展及人类生殖健康具有重要意义。下丘脑GnRH脉冲式释放在初情期启动中发挥关键作用,而这一分泌受到松果腺内分泌的严密调控。本论文对初情期前和初情期山羊松果体进行了全基因组DNA甲基化测序(whole-genome bisulfite sequencing,WGBS),对测序结果进行了GO(Gene Ontology)富集分析和KEGG(kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信号通路分析,旨在筛选与山羊初情期启动相关并受表观遗传调控的松果腺候选基因,为阐明山羊初情期启动机制,进而提高山羊繁殖性能奠定基础。试验结果如下:(1)初情期前山羊松果腺基因组中,C(Cytosine)区域、CG(Cytosine Guanine)区域、CHG区域、CHH区域(其中H代表A、C、T)的甲基化C位点分别占全部C位点的1.86%、35.73%、0.08%、0.13%;初情期山羊松果腺基因组中,C(Cytosine)区域、CG(Cytosine Guanine)区域、CHG区域、CHH区域(其中H代表A、C、T)的甲基化C位点分别占全部C位点的1.93%、39.01%、0.08%、0%。共检测出846个差异甲基化区域(Differentially Methylated Regions DMR)。基因组不同功能区域甲基化水平,启动子、内含子和3’UTR(Untranslated Regions)高于5’UTR和外显子区域,对甲基化密度分析,发现类似的情况。(2)对测序数据运用GO富集分析发现多个与研究的生物学功能相关的分子功能富集项,主要包括结合区域、蛋白结合、离子结合、水解酶活性、钙离子结合、激酶活性等分子功能区域。通过通路显著性富集能确定DMRs相关基因参与的最主要生化代谢途径和信号转导途径;KEGG代谢通路分析发现,测序结果与生殖内分泌相关的通路主要有促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)、催产素、孕激素介导的卵母细胞成熟、雌激素、卵巢类固醇、GABA能突触、类固醇生物合成、催乳素信号通路。(3)对富集通路相关的基因应用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)验证发现,与初情期对比,仅HPSE、CAMK1G两个基因表达量升高,这两个基因分别与类固醇生物合成、催产素信号通路相关。其中8个基因表达变化与DNA甲基化变化正相关,4个基因表达与DNA甲基化负相关,并且这些基因均存在于染色体的内含子区域。总结:安淮山羊松果体全基因组甲基化水平在初情期前后无明显变化,但甲基化谱式发生了明显改变,说明松果腺基因组DNA甲基化可能参与调控了山羊初情期启动。
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