糖肽/糖蛋白富集新技术的研究

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糖蛋白与很多疾病如感染、肿瘤、心血管病、肝病、肾病、糖尿病以及某些遗传性疾病等的发生、发展有关。蛋白质糖基化修饰在生理、病理、免疫学和临床上的重要意义,使其成为目前蛋白质组学研究的活跃领域。本论文以探索糖蛋白和糖肽富集与分析的新方法为主要内容,为糖蛋白组学研究提供了新的策略和技术方法。第一章首先介绍了糖蛋白质组学的诞生与发展,重点介绍了糖肽分离富集技术和糖蛋白鉴定/糖基化位点确定方法,以及基于生物质谱在糖蛋白研究中的应用。第二章工作主要是合成氨基苯硼酸修饰的磁性碳球材料,并将该材料用于糖肽和糖蛋白的特异性富集。利用该材料对标准糖蛋白HRP和ASF酶解后的肽段富集,发现其中糖肽质谱峰的信号强度和信号比都有很大程度的提高;对HRP和BSA混合蛋白富集后,SDS-PAGE电泳分析结果显示,洗脱液中只存在糖蛋白HRP的条带,说明了该纳米粒子对糖蛋白的特异性富集。第三章发展了巯基苯硼酸修饰的纳米金材料在靶板上富集糖肽的方法,利用导电胶将纳米金材料固定到MALDI靶板上,糖蛋白质酶解产物中的糖肽可通过与纳米金材料上巯基苯硼酸的共价作用,固定在粘附了纳米金材料的MALDI靶上,再通过洗涤除去非糖肽,这样靶板上只存在糖肽,便于对糖肽进行质谱分析。另一个方面,纳米金材料的存在也可对糖肽的离子化程度有一定的提高。这种方法可以方便、快捷的对糖肽进行富集和鉴定。第四章将巯基苯硼酸修饰的纳米金材料应用于大鼠肝脏中糖蛋白糖基化位点的鉴定,共鉴定到46个糖蛋白中的46个糖基化位点,为该材料用于实际样品做了初步的尝试。
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