论文部分内容阅读
原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,近年来一些研究发现环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)在原发性肝癌表达增高,推测其可能参与了PHC的发生及进展。本课题通过小干扰RNA(siRNA)降低COX-2基因表达,观察其对肝癌细胞HepG2增殖的影响,并探讨其作用的可能机制,旨在为治疗肝癌的新手段提供实验依据。目的:探讨小干扰RNA降低环氧化酶-2基因表达对肝癌细胞HepG2增殖与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)表达的影响方法:以HepG2细胞为研究对象,实验分成四组:COX-2 siRNA干预组、对照siRNA组、空脂质体组和空白组。MTT法测定各组细胞24h、48h、72h的增殖抑制率;流式细胞仪测定各组细胞培养24h后细胞周期;半定量RT-PCR检测各组细胞培养24h后COX-2、ERK1/2mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(western blotting)测定各组细胞培养24h后COX-2、ERK1/2蛋白的表达。结果: (1) MTT法结果显示:COX-2siRNA干预组的增殖抑制率明显高于阴性对照组、空脂质体转染组(P<0.01)。阴性对照组与空脂质体转染组之间的差异无显著性(P>0.05)。COX-2siRNA干预组24h抑制率高于48h及72h。(2)流式细胞仪分析结果表明:COX-2siRNA干预组细胞G1期(DNA合成前期)细胞明显增多,与空白组、空脂质体组及阴性对照组相比,均具有明显差异(P<0.05)。(3) RT-PCR结果显示:与空白组、空脂质体组及阴性对照组比较,COX-2siRNA干预组的COX-2、ERK1/2 mRNA表达明显降低,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。(4) western blotting结果显示:与空白组、空脂质体组及阴性对照组比较,COX-2siRNA干预组的COX-2、ERK1/2蛋白表达明显降低,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:小干扰RNA可降低肝癌细胞HepG2的COX-2基因表达,抑制肝癌细胞的生长。COX-2促进肝癌肝癌生长可能与ERK1/2通路调控有关。