一株抑制稻瘟菌的解淀粉芽孢杆菌的分离与次生代谢产物成分分析

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稻瘟病是影响水稻产量最为严重的病害之一,目前以筛选具有抗性的水稻品种和化学防治手段相结合的方法来预防和治疗,随着人们生活水平的提高,稻瘟病的耐药性的增强以及抗性品种相关抗性的降低,利用天然产物或生物农药等防控手段的需求越来越大。1.本研究从抑菌试验中分离到的一株能够抑制稻瘟病生长的芽孢杆菌菌株。通过对其次生代谢产物进行分离和纯化,找到了数种具有生物活性的天然产物,并测定了其中一种活性物质的分子量。希望能够从其中筛选出具有良好生物活性,成本低廉的新次生代谢产物。2.试验中分离到5株对稻瘟病有抑制效果的菌株中,选择了效果最好的一株菌株进行研究,并暂命名为Rdx5。经形态学观察、淀粉水解酶观察和基于16SrDNA的系统进化树分析,确认该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefa ciens)。3.试验选用Landy液体培养基对Rdx5进行发酵培养,发酵液具有良好的抑制效果,说明活性成分存在于溶液中。同时,我们也做了抗生素敏感性试验,Rdx5表现出对多种抗生素敏感。4.Rdx5的次生代谢产物中,具有多种对稻瘟病有抑制作用的生物活性物质。液相萃取后在氯仿层、甲醇层、水层均有活性。氯仿/丙酮分配和高效液相色谱分析发现,仅在氯仿萃取层中至少含有三种生物活性物质。抑制稻瘟病的次生代谢产物具有良好的热稳定性和紫外线稳定性,酸碱稳定性较差。利用液相萃取、高效液相色谱技术,试验在数种具有抑菌活性的次生代谢产物中选择了一种进行了分离纯化,并最终得到了该生物活性物质,质谱分析表明,活性物质的分子量为586.2759。
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