ID-1、Survivin和Caspase-3在ALA-光动力诱导皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡中的作用

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皮肤鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC),是起源于表皮附属器角质形成细胞的一种恶性肿瘤,具有病因复杂、临床误诊率高、恶性度大及侵袭性和破坏性强等特点。目前皮肤鳞癌的治疗方法有手术切除、放射治疗、外用药物治疗及光动力治疗等。光动力疗法(Photodynamic therapy, PDT)又被称为光辐射疗法(Photoratiation Therapy, PRT)或光化学疗法(Photochemotherapy),是一种正在研究发展中的,治疗某些体表良、恶性病变的有效方法,部分成果已经应用于临床。近年来,5-ALA (5-aminolevulinic acid,5-氨基酮戊酸)介导的光动力疗法(5-ALA-PDT)成功应用于非黑素性皮肤癌的治疗,但其作用机制还有待于研究阐明。目的:1.检测ID-1、Survivin和Caspase-3蛋白和mRNA在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中的表达,探讨其临床意义;2.观察5-ALA-PDT对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的杀伤灭活作用;3.观察5-ALA-PDT后人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中ID-1、Survivin和Caspase-3蛋白表达水平的变化,探讨5-ALA-PDT诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡的可能机制,为光动力治疗皮肤鳞状细胞癌提供理论依据。方法:1、采用Western Blot法和RT-PCR法检测ID-1、Survivin和Caspase-3在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞和角质形成细胞(Hacat细胞)中的表达水平;2、A431细胞与5-ALA共同培育,经630nm激光照射后,采用MTT法测其细胞抑制率,探讨培育时间、5-ALA浓度及光照剂量对其介导的光动力效应的影响;3、A431细胞经5-ALA-PDT处理后,分别于0h、2h、6h、12h、24h、48h后提取蛋白,采用Western Blot法检测ID-1、Survivin和Caspase-3蛋白的变化。结果:1、ID-1和Survivin蛋白和mRNA在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中高表达,而在Hacat细胞中低表达或不表达,其表达强弱差异有统计学意义(P<0.05);而Caspase-3蛋白和mRNA的表达与之相反,其表达差异也有统计学意义(P<0.05);2、光照剂量和5-ALA浓度相同时,5-ALA与A431细胞共同培养120min时,其介导PDT的杀伤作用最强;3、光照剂量和培养时间相同时,5-ALA浓度为3.2mmol/L时,其介导PDT的杀伤作用达到了饱和;4、培养时间和5-ALA浓度相同时,光照剂量为80J/cm2时,其对A431细胞的抑制率达到最大;5、单独照光及单独加药对A431细胞并无杀伤或促进其生长的作用;6、ID-1和Survivin在5-ALA-PDT处理后的A431细胞中蛋白表达水平随时间延长呈下降趋势,其差异具有统计学意义(P<0.05);7、Caspase-3在5-ALA-PDT处理后的A431细胞中蛋白表达水平随时间延长呈上升趋势,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、高表达的ID-1和Survivin,低表达的Caspase-3可能参与皮肤鳞癌的形成;2、5-ALA-PDT对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞有明显的杀伤效应;3、5-ALA-PDT诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖或凋亡的机制,可能与5-ALA-PDT直接或间接抑制ID-1和Survivin的表达、促进Caspase-3的表达有关。
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