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杏仁体(amygdala, AM)和海马结构(hippocampal formation, HF)是与情绪活动和学习记忆相关的重要结构,AM和HF内的转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)被证实在记忆调节过程中发挥了重要作用。CREB是一种核蛋白,是刺激诱导转录因子的主要成员,多种刺激都可导致CREB的活化,形成磷酸化的CREB(pCREB)。神经生理及神经药理学的研究表明,在突触可塑性的长时程效应阶段,CREB可调节基因转录、参与蛋白质合成,从而维持突触效率的长期持续改变。但是形态上,目前还不清楚AM、HF等脑区内的CREB究竟在哪类神经元中表达而发挥作用。为此本实验准备进一步探讨:① 应激刺激后AM和HF内pCREB表达量的变化;② pCREB在什么神经元中表达;③ pCREB的表达与NMDA受体活性的关系。本实验作了如下工作: 1.对SD大鼠强迫性游泳(FS),建立情绪性应激刺激动物模型,以正常同类大鼠为对照,用免疫细胞化学单标法、蛋白免疫印迹实验,以抗pCREB抗体观察检测pCREB免疫阳性神经元在对照组和实验组大鼠AM各亚核团和HF内的分布特征及变化规律;用免疫细胞化学双标法和免疫电镜,以抗pCREB、抗Glu和抗PV抗体,分析了表达pCREB神经元的类型。结果显示:①FS刺激后,pCREB免疫阳性细胞核在AM的外测核(LA)、基底外侧核(BL)、中央核(Ce)以及HF的齿状回(DG)和CA3区的数量明显增加。FS 1h后Ce内pCREB阳性细胞核数目最多,为1082±229个/mm~2;而LA内的pCREB阳性细胞核数目变化最大,对照组为578±106个/mm~2;而FS 15min后则为1078±338个/mm~2。在DG颗粒细胞层内,对照组的pCREB阳性细胞核数目很少,成线状散在分布;而FS后pCREB阳性细胞核的数目明显增多,成带状密布于整个DG颗粒细胞层。FS后,AM各亚核团内pCREB免疫阳性细胞核的变化趋势具有时间相关性,本实验观察到,LA内的pCREB表达量在FS后15min达到高峰,而Ce内的pCREB则在FS后1h表达量最高。免疫蛋白印迹的实验结果与上述变化密切相关,显示,FS刺激后AM各亚核和HF内pCREB总蛋白量都明显增加。②免疫细胞化学双标结果显示,在LA、BL、Ce、DG和CA3区中,呈绿色荧光的pCREB免疫阳性神经元细胞核,位于呈红色Glu免疫阳性的神经元胞质内,而未见其在