论文部分内容阅读
目的：本研究论文的目的是分离鉴定两面针提取物中具有显著调节STAT3信号通路的活性成分,评价STAT3信号通路小分子抑制剂的体内外抗肿瘤和抗炎症等药理活性。方法：①利用HepG2/STAT3报告基因测试筛选提取物和化学组分；②基于活性导向法,综合利用silica gel, sephadex LH-20, PTLC和HPLC等色谱分离两面针提取物中的化学成分；③综合利用NMR和MS等波谱学数据鉴定和表征化合物分子结构；④评价化合物对不同肿瘤细胞信号通路选择性；⑤利用细胞分子生物学技术评价和探讨抑制剂体外对肿瘤(干)细胞增殖,凋亡和迁移活性,并利用人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型进一步评价体内抗肿瘤效果；⑥利用小鼠烫伤炎症模型,评价抑制剂对小鼠烫伤皮肤伤口愈合的药效。结果：①利用HepG2/STAT3报告基因测试表明两面针根乙酸乙酯和甲醇提取物表现出显著活性;②基于活性测试为导向从两面针乙酸乙酯和甲醇提取物中分离获得12个化合物,鉴定11个化合物,分别为：8-methoxy-dihydrochelerythrine (YS12806),8-methoxy-9-demethoxyldihydrochlerythrine (MH24701),oxychelerythrine (MH23711), avicine (MH24506), nitidine (MH24218), liriodenine (MH24404), isobutyl benzoate (MH32501),L-sesamin (YS13805), skimmianine (YS13206), β-stigmasterol (YS13806)和4-hydroxy-N-methylproline (YS12903);③实验证实8-methoxy-dihydrochelerythrine为药理活性较强的选择性STAT3信号通路抑制剂(IC50=7.1μM);④YS12806显著抑制多种人肿瘤(干)细胞增殖(IC50=0.22-8.0μM)并诱导其凋亡,抑制肿瘤细胞迁移和侵袭,抑制JAK2和STAT3的磷酸化水平,下调JAK2/STAT3信号通路下游功能蛋白如Cyclin B1、Survivin. ICAM-1、VEGF的表达水平；⑤YS12806在20mg/Kg剂量时能显著抑制人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤的成长；⑥YS12806显著促进烧烫伤性伤口愈合。结论：本实验论文基于活性导向法从两面针提取物中分离鉴定11个化合物结构,avicine, isobutyl benzoate和4-hydroxy-N-methylproline为首次从该植物中分离获得；实验证实先导化合物8-methoxy-dihydrochelerythrine (YS12806)是药理活性较强的选择性STAT3信号通路小分子抑制剂,为特异性分子靶向抗癌药物研发奠定了科学基础。