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本实验对五指山猪精液冷冻做了改进,对IVM-IVF培养体系以及早期胚胎发育环境进行了探索,实验结果如下:1.五指山猪精液冷冻的研究利用液氮熏蒸法进行颗粒冻精,以解冻后的精子活力、活率和顶体完整性为判断标准,(1)比较了4种不同冷冻保护液对五指山猪精液冷冻的影响,结果表明:2组,3组冷冻保护液以氨基酸代替部分糖类物质,解冻后精子3个判断标准均显著高于1组(P<0.05);4组(2.5mIDMSO)冷冻保护液解冻精子的活力和活率显著低于2组(2ml甘油)和3组(1.25mIDMSO+1ml甘油)(P<0.05)。(2)降温平衡时间2h(4℃)组精液解冻后精子活力显著高于平衡5h(17℃3h+4℃2h)组(P<0.05)。(3)精清保留量为0ml/10ml时解冻精子的活率和活力显著低于保留0.5ml/10ml和1ml/10ml(P<0.05)。(4)干解法解冻后精子活率显著高于湿解法(P<0.05)。2.体外受精和早期胚胎发育的研究比较了不同基础培养液对卵母细胞体外成熟和体外受精胚胎早期发育的影响,冷冻精液和正常精液对受精和早期胚胎发育的影响以及添加中药成分对早期胚胎发育的影响。实验证明:(1)NCSU-23培养基在卵母细胞成熟(75.45%)方面显著优于TCM-199(64.38%)(P<0.05),二者对于促进早期胚胎发育(囊胚率10.24%和9.42%)差异不明显(P>0.05)。(2)冷冻精液体外受精的受精率(67.96%)、桑椹胚率(44.66%)与新鲜精液受精率(67.41%)、桑椹胚率(45.09%)无显著差异(P>0.05);鲜精受精囊胚率(10.27%)显著高于冻精(4.37%)(P<0.05)。(3)体外受精胚胎培养液中添加体积比0.10%的中药肉苁蓉和0.10%的黄芪,肉苁蓉添加组囊胚率(15.76%)显著高于空白组(9.26%)(P<0.05),黄芪添加组囊胚率(10.09%)与空白组(9.26%)差异不显著(P<0.05),表明肉苁蓉能够显著促进早期胚胎发育。(4)肉苁蓉添加浓度(V/V)为0.05%和0.10%时,囊胚率(17.02%和16.75%)显著高于空白组(0)(P<0.01)和0.15%组(8.94%)(P<0.05)。(5)早期胚胎时期,培养液在2细胞期添加0.10%中药肉苁蓉,囊胚发育率(13.81%)显著高于4细胞期(7.53%)(P<0.05),比卵裂之前时期添加肉苁蓉(13.67%)稍高,但差异不明显(P>0.05)。